柑橘组织冰冻切片   

姜楠姜楠*贾慧慧 贾慧慧 *郭文武 郭文武  (*contributed equally to this work)
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Original research article

A brief version of this protocol appeared in:
Rice Protocol e-book

实验原理及目的:冰冻切片适用于水分较多且容易收缩的材料。冰冻切片制片时间短,对样品组织损伤小,保护生物活性。但对切片技术、操作条件要求较高,被切细胞和形态结构不如石蜡切片好,因此具有一定的局限性。

关键词: 冰冻切片, 细胞, 形态

材料与试剂

  1. 毛刷
  2. 载玻片
  3. 柑橘果皮
  4. 包埋剂 (O.C.T. Compound SAKURA Tissue-Tek, calalog number: 4583)
  5. 液氮
  6. 乙醇
  7. 乙酸
  8. 蔗糖
  9. 甘油
  10. PBS

仪器设备

  1. 单面刀片
  2. 冰冻切片机 (Leica, model: CM1950)
    注:CM1950冰冻切片机使用说明见附录

实验步骤

  1. 材料处理
    根据不同材料特性,可以选用不同的处理方式:
    1.1
    将材料分割成合适大小,不超过5 mm3,浸没于包埋剂1-5 min,时间不要太久,液氮速冻30 s-1 min或者放于冰冻切片机内速冻模块上速冻。
    1.2
    将材料分割成合适大小,不超过5 mm3,放于卡诺固定液 (纯乙醇15 ml,乙酸5 ml) 中,固定24 h后,由低浓度到高浓度换不同浓度保护剂 (常用蔗糖保护剂或甘油) 处理材料,再将材料浸没包埋剂中,液氮速冻30 s-1 min包 埋。
    注 (常用保护剂):
    10%蔗糖保护剂:10 g蔗糖 + 100 ml PBS
    15%蔗糖保护剂:15 g蔗糖 + 100 ml PBS
  2. 修块、切片、粘片:将包埋好的材料粘在样品托上,用遇冷的刀片修整包埋块到合适大小进行切片,切片厚度一般10-14 µm。将切片粘附于干净的载玻片上。
    注:
    1)
    OCT冻结后变得不透明,修块时要注意样品位置。
    2)
    可以用室温下的载玻片靠近切片,切片会自动粘附上。
  3. 染色 (选做)
    用蒸馏水洗去切片上的包埋剂。将切片转入染色液中染色,用吸水纸擦拭干载玻片底面以及周围,置显微镜上观察。
Copyright: © 2018 The Authors; exclusive licensee Bio-protocol LLC.
引用格式:姜楠, 贾慧慧 , 郭文武 . (2018). 柑橘组织冰冻切片. Bio-101: e1010195. DOI: 10.21769/BioProtoc.1010195.
How to cite: Jiang, N., Jia, H. H. and Guo, W. W. (2018). Cryosectioning Method for Citrus Tissue . Bio-101: e1010195. DOI: 10.21769/BioProtoc.1010195.
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