Determination of Malondialdehyde (MDA) Content in Rice Leaves   

材料与试剂

1. 冰盒
   
2. 塑料袋
   
3. 1.5 ml、10 ml离心管
   
4. TCA (三氯乙酸)
   
5. TBA (硫代巴比妥酸)
   
6. 10% TCA (见溶液配方)
   
7. 5% TCA (见溶液配方)
   
8. 0.67% TBA (见溶液配方)
   

仪器设备

1. 剪刀
   
2. 研钵
   
3. 100 ml容量瓶
   
4. 天平
   
5. 冷冻离心机
   
6. 电磁炉
   
7. 比色皿及分光光度计(DU640)
   

实验步骤

1. 冰盒取样水稻叶片样品，置于封闭的塑料袋中，带回实验室立即测定。
   
2. 天平称取0.5 g水稻叶片，剪刀剪碎后加5% TCA (见溶液配方) 5 ml，用预冷的研钵置于冰上研磨至匀浆状，倒入10 ml离心管中。
   
3. 在3,000 rpm下冷冻(4 °C)离心10 min，取上清液2 ml至新的10 ml离心管中，向其中加入0.67% TBA (见溶液配方) 2 ml，混合后在100 °C沸水中煮30 min，室温自然冷却后取1.5 ml上清至新1.5 ml离心管中，室温12,000 rpm离心后取上清。
   
4. 用分光光度计分别测定上清液在450 nm、532 nm和600 nm处的吸光度值。并按公式算出MDA浓度，再算出单位鲜重组织中的MDA含量(μmol/g)。
   
5. 结果计算，按公式 C/μmol/L = 6.45 (A₅₃₂-A₆₀₀) - 0.56 A₄₅₀
   式中A₄₅₀、A₅₃₂、A₆₀₀分别代表450 nm、532 nm和600 nm波长下的吸光度值。
   

注意事项

1. 检测生理指标的水稻组织质量应该一致，保证较好的实验结果。
   
2. 检测植物生理指标所用试剂，最好现配现用。
   
3. 用分光光度计测定吸光度时应注意分光光度计的测定范围。
   

溶液配方

1. 10% TCA
   称取10 g TCA，使用ddH₂O溶解，转移至100 ml容量瓶中定容
   
2. 5% TCA
   将10%的TCA用ddH₂O稀释一倍
   
3. 0.67% TBA
   称取0.67g TBA用10%的TCA溶解，转移至100 ml容量瓶中用10% TCA定容