摘要:在对脑组织进行切片和免疫染色或原位杂交等实验之前,为了排除血液对实验的干扰,通常会用生理盐水对小鼠心脏灌流后再进行解剖和切片。在灌流时,既可以在左心室插针,也可以经由左心室对主动脉进行插针,后者有助于提升灌流速度和成功率。生理盐水灌流结束后,通常继续灌流多聚甲醛固定脑组织,并在剥离取脑后再进行更长时间的后固定,以便后续切片开展实验。
关键词: 小鼠, 心脏灌流, 主动脉, 多聚甲醛, 固定
材料与试剂
仪器设备
图1. 手术器械
实验步骤
图2. 小鼠抓取与腹腔注射
注:对于出生6天以内的新生小鼠,可采用低温麻醉。将新生小鼠放入纸筒、塑料管或包裹在乳胶手套中 (可剪下乳胶手套的拇指部分用于放置小鼠),用碎冰埋至颈部,保持10~15分钟以达成深度麻醉状态。麻醉状态在常温下仅能保持约10分钟,因此不能将小鼠长时间留在手术台上,应尽快进行手术。
图3. 修剪针头 (A) 未修剪针头 (B) 修剪后针头
图6. 剥离鼠脑。(A) 断颈,从颈部朝鼻尖方向 (虚线) 剪开头部上方皮毛,暴露颅骨。(B~C) 沿虚线剪除脑干以下的颅骨,依次移除小脑和大脑部位的颅骨,暴露脑组织。
图7. 不同灌流状态鼠脑外观。(A) 未灌流鼠脑,外观呈红色,可见明显红色血管分布; (B) 灌流失败鼠脑,整体外观呈现粉红色; (C) 灌流成功且未进行后固定鼠脑,整体颜色较白; (D) 后固定后鼠脑体积略微缩小,颜色略微加深。
失败经验
表1. 常见问题分析及解决方案
溶液配方
伦理学声明
本实验对小鼠进行的所有研究行为均遵循和符合国家《实验动物管理条例》和有关动物保护与使用的法律和法规,并获得复旦大学实验动物中心动物伦理委员会批准。
参考文献
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