Improve Research Reproducibility A Bio-protocol resource

小鼠心脏灌流、脑组织解剖与固定

Transcardiac Perfusion of Mouse Brain Dissection and Fixation

蔡 蔡予琦*
吴 吴锦云*
吴 吴晓阳
应 应玥
邰 邰一琳
何苗 何苗

*Contributed equally to this work 发表时间: 2020年09月28日 DOI: 10.21769/BioProtoc.1010353 浏览次数: 24111

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摘要：在对脑组织进行切片和免疫染色或原位杂交等实验之前，为了排除血液对实验的干扰，通常会用生理盐水对小鼠心脏灌流后再进行解剖和切片。在灌流时，既可以在左心室插针，也可以经由左心室对主动脉进行插针，后者有助于提升灌流速度和成功率。生理盐水灌流结束后，通常继续灌流多聚甲醛固定脑组织，并在剥离取脑后再进行更长时间的后固定，以便后续切片开展实验。

Keywords: 小鼠 search 心脏灌流 search 主动脉 search 多聚甲醛 search 固定 search

材料与试剂

  1. 量筒 (蜀牛)
  2. 烧杯 (蜀牛)
  3. 温度计
  4. 生理盐水 (0.9%氯化钠溶液)
  5. 1.5%戊巴比妥钠溶液 (溶于生理盐水中)
  6. NaH2PO4•2H2O (沪试，catalog number: 20040718)
  7. Na2HPO4•12H2O (沪试，catalog number:10020318)
  8. 多聚甲醛 (Sigma，catalog number: 158127)
  9. NaOH (沪试，catalog number: 10019718)
  10. HCl (生工，catalog number: 10011018)
  11. 去离子水
  12. 4%多聚甲醛溶液 [溶于0.1 M磷酸缓冲液 (PB)，pH 7.0~7.4，见溶液配方]

仪器设备

  1. 通风橱
  2. 解剖镊 (瑞沃德，catalog number: F12018-13)
  3. 眼科镊 (瑞沃德，catalog number: F12006-10)
  4. 止血钳 (瑞沃德，catalog number: F21002-12)
  5. 解剖剪 (瑞沃德，catalog number: S13052-12)
  6. 精细剪 (瑞沃德，catalog number: S12005-10)
  7. 血管夹 (瑞沃德，catalog number: R33001-48)
  8. 称量勺 (Fisher Brand，catalog number: 21-101-10)
  9. 1毫升无菌注射器 (洪达，catalog number: zsq08)
  10. 4号或5号静脉输液针 (丰临)
  11. 20毫升注射器 (洪达，catalog number: zsq08)
  12. (可选) 恒流泵 (LONGERPUMP，catalog number: BT100-2J)
  13. 带加热装置的磁力搅拌器 (SCILOGEX，catalog number: MS7-H550-Pro)
  14. 分析天平 (SARTORIUS，catalog number: BSA124S)
  15. 微型台式真空泵 (LONGERPUMP，catalog number: BT100-2J)
  16. 50毫升离心管 (THERMO，catalog number: 339652)
  17. 0.22微米PVDF瓶顶过滤器 (Thermo Fisher，catalog number: 291-4520)



    图1. 手术器械

实验步骤

Copyright: © 2020 The Authors; exclusive licensee Bio-protocol LLC.
引用格式：蔡予琦, 吴锦云, 吴晓阳, 应玥, 邰一琳, 何苗. (2020). 小鼠心脏灌流、脑组织解剖与固定. Bio-101: e1010353. DOI: 10.21769/BioProtoc.1010353.
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分类

神经科学 > 细胞机理 > 细胞粘附

细胞生物学 > 组织分析 > 组织培养

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