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流式细胞术检测细胞凋亡 (Annexin V/PI法)

Flow Detection of Apoptosis by Annexin V/PI

葛 葛灵
王 王雪冬
丁 丁宇波
边 边玮

发表时间: 2019年11月20日 DOI: 10.21769/BioProtoc.1010331 浏览次数: 18451

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流式细胞术实验手册
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摘要：磷脂酰丝氨酸 (phosphatidylserine，PS) 又称复合神经酸，位于正常细胞膜的胞质一侧，在细胞凋亡早期，PS可从细胞膜胞质侧翻转到细胞膜外表面。基于此现象，利用Ca2 +依赖性Annexin V可与PS特异性结合，且亲和力高，适用于细胞凋亡早中期的检测。PI为一种核酸染色剂，与细胞核结合将细胞核染为红色。PI不可透过正常的细胞膜，可透过凋亡中晚期以及坏死细胞的细胞膜，适用于在排除细胞坏死的前提下细胞凋亡中晚期检测。将Annexin V与PI同时使用，通过分群表征出正常、坏死、凋亡和机械性损伤的细胞。在该实验中，我们对HeLa细胞的对照组和H2O2诱导组进行Annexin V/PI双标记，经流式细胞仪检测出不同特性的细胞群。

Keywords: 细胞凋亡 search Annexin V/PI search 流式检测 search HeLa细胞 search

材料与试剂

  1. 5 ml流式管 (Falcon，catalog number: 352008)
  2. 15 ml离心管 (Falcon，catalog number: 352097)
  3. HeLa细胞
  4. Annexin V-Alexa Fluor™488 (Invitrogen，catalog number: A13201)
  5. PI碘化丙啶 (Sigma-Aldrich，catalog number: P4170)
  6. NaCl 
  7. Na2HPO4 
  8. KCl 
  9. KH2PO4
  10. H2O2
  11. DEME培养基
  12. HEPES
  13. CaCl2
  14. PI染色工作液 (见溶液配方)
  15. 1× Binding buffer (见溶液配方)
  16. PBS (见溶液配方)
  17. 800 μM H2O2 (见溶液配方)

仪器设备

  1. 水平离心机 (BeckmanCoulter, model: Allegra X-12R)
  2. 光学显微镜 (Olympus, model: IX73)
  3. 流式细胞仪 (FACSFortessa)

实验步骤

Copyright: © 2019 The Authors; exclusive licensee Bio-protocol LLC.
引用格式：葛灵, 王雪冬, 丁宇波, 边玮. (2019). 流式细胞术检测细胞凋亡 (Annexin V/PI法). Bio-101: e1010331. DOI: 10.21769/BioProtoc.1010331.
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How to cite: Ge, L., Wang, X. D., Ding Y. B. and Bian, W. (2019). Flow Detection of Apoptosis by Annexin V/PI. Bio-101: e1010331. DOI: 10.21769/BioProtoc.1010331.
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分类

细胞生物学 > 单细胞分析 > 流式细胞术

细胞生物学 > 细胞活力 > 细胞死亡

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