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常用细胞周期流式检测方法

Cell Cycle Analysis by Flow Cytometry

涂 涂溢晖
王 王雪冬
丁 丁宇波
边 边玮

发表时间: 2019年11月20日 DOI: 10.21769/BioProtoc.1010328 浏览次数: 16403

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流式细胞术实验手册
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摘要：细胞周期 (cell cycle) 是指细胞从上一次分裂完成到下一次分裂结束所经历的全部过程，包括分裂间期和分裂期 (M期)，其中分裂间期又可分为DNA合成前期 (G1期)、DNA合成期 (S期)、DNA合成后期 (G2期)。G0期是静止期细胞，它们暂时脱离细胞周期，停止细胞分裂，但在一定条件的刺激下，又可重新进入细胞周期进行分裂 (Cooper, 2000)。细胞是生命活动的基本单位，而细胞周期又与细胞的增殖和分化密切相关。因此，对于细胞周期的检测至关重要。细胞内的DNA含量会随细胞周期进程而发生周期性变化，通过流式细胞仪对细胞内DNA的相对含量进行测定，可分析细胞周期各阶段的百分比。常用于测定DNA含量的染料有碘化丙啶 (PI)、4',6-二脒基-2-苯基吲哚 (DAPI)、7-氨基放线菌素 (7-AAD)、Hoechst 33342、Hoechst 33258等。本文主要就其中两种常用染料PI (固定细胞染色) 和Hoechst 33342 (活细胞染色) 的实验方法、注意事项和结果分析展开介绍。

Keywords: 细胞周期 search 流式细胞术 search 碘化丙啶 search Hoechst search

材料与试剂

  1. 15 ml离心管 (Falcon, catalog number: 352097)
  2. 5 ml流式管 (Falcon, catalog number: 352008)
  3. 200目细胞过滤膜
  4. Hoechst 33342 (Sigma-Aldrich, catalog number: B2261)
  5. NaCl
  6. Na2HPO4
  7. KCl
  8. KH2PO4
  9. 70%乙醇
  10. 碘化丙啶 (PI) (Sigma-Aldrich, catalog number: P4170)
  11. 核糖核酸酶 (Roche, catalog number: 11119915001)
  12. 磷酸缓冲液 (1× PBS) (见溶液配方)
  13. 碘化丙啶 (PI) 溶液 (见溶液配方)
  14. 核糖核酸酶 (RNase) 溶液 (见溶液配方)
  15. Hoechst 33342溶液 (见溶液配方)

仪器设备

  1. 涡旋混合器 (其林贝尔, model: VORTEX-6)
  2. 水平离心机 (Beckman Coulter, model: Allegra X-12R)
  3. 光学显微镜 (Olympus, model: IX73)
  4. 流式细胞仪 (BD FACSFortessa)

实验步骤

Copyright: © 2019 The Authors; exclusive licensee Bio-protocol LLC.
引用格式：涂溢晖, 王雪冬, 丁宇波, 边玮. (2019). 常用细胞周期流式检测方法. Bio-101: e1010328. DOI: 10.21769/BioProtoc.1010328.
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How to cite: Tu, Y. H., Wang, X. D., Ding, Y. B. and Bian, W. (2019). Cell Cycle Analysis by Flow Cytometry. Bio-101: e1010328. DOI: 10.21769/BioProtoc.1010328.
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分类

细胞生物学 > 单细胞分析 > 流式细胞术

细胞生物学 > 细胞成像 > 固定细胞成像

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