摘要:初级感觉神经元是介导躯体感觉传导的一类假单极神经元,包括传递疼痛、痒觉、热、机械感觉、本体感觉以及多种伤害性刺激反应。初级感觉神经元的胞体聚集在一起形成背根神经节 (Dorsal Root Ganglion, DRG),具有很高的细胞异质性。近年来大规模的单细胞测序技术根据不同的分子标记物和躯体感觉传递功能将初级感觉神经元分为10类 (Li等,2016)。然而,不同细胞类型的初级神经元发挥躯体感觉传递功能的分子调控机制却远未研究清楚。流式细胞分选能够将荧光标记的细胞分选并富集,是研究特异类型细胞功能和分子机制的重要技术。目前,流式分选在肿瘤、免疫和干细胞等领域广泛应用,但在初级感觉神经元中的研究相对较少。本文主要介绍了在Sst-Cre;Ai9-tdTomato小鼠中得到选择性表达Somatostatin这类初级感觉神经元的流式分选方法。
关键词: 背根神经节神经元, 细胞类型特异, 流式分选
材料与试剂
仪器设备
实验步骤
实验前准备
小鼠DRG取材
DRG神经元的分离
结果与分析
在分选的过程中,我们可以发现具有红色荧光的Somatostatin阳性神经元在背根神经节比例为5.64% (图2A和图2B)。在分选前培养的Somatostatin神经元中,红色阳性的神经元零散的分布于整体培养细胞中。经过分选后,可以发现明场视野中的细胞几乎全部为带有红色荧光的神经元,提示我们成功分选了小鼠中Somatostatin阳性的背根神经节神经元 (图2C),6只成年小鼠总共分选得到1.5 × 104 个Somatostatin阳性神经元。之前的研究表明,Somatostatin阳性DRG神经元主要参与调控痒觉传递 (Stantcheva等,2016),通过流式分选的方法富集这类神经元对于研究痒觉的分子调控机制具有重要的意义。 图2. 小鼠背根神经节Somatostatin阳性神经元的分选. A. 流式分选小鼠背根神经节SomatostatinT阳性神经元的划分范围。B. 最终分选成功后Somatostatin阳性神经元的比例为5.64%。C. 明场和荧光显微镜观察流式分选后富集的背根神经节Somatostatin阳性神经元。比例尺:100 μm。
注意事项
溶液配方
致谢
工作得到了中国科学院分子细胞科学卓越创新中心、中国科学院生物化学与细胞生物学研究所以及细胞分析技术平台的大力支持。
参考文献
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