摘要:果蝇作为经典的模式动物,拥有其他生物无法比拟的遗传学操作优势。除此之外,伴随着生物学技术的发展,如何将现代生物学技术和传统的遗传操作相结合,可能是果蝇这种模式生物迎来新发展的契机。这里我们以果蝇血液系统为例,结合血细胞特异性表达的UAS-GAL4遗传系统,描述如何利用流式细胞术分析果蝇的外周血。
关键词: 果蝇, 血细胞, 流式细胞术
材料与试剂
仪器设备
实验步骤
结果与分析
果蝇的血液系统包含三种细胞:plasmatocytes,crystal cells和lamellocytes。其中在成熟的三龄幼虫血液体系中,plasmatocytes占比达90~95%,主要行使着吞噬的功能已达到去除死细胞以及外源病原菌的作用 (Lemaitre和Hoffmann,2007)。因此,果蝇的血细胞类似于哺乳动物的巨噬细胞。除了吞噬功能以外,在免疫刺激后血细胞也会产生抗菌肽,起到系统免疫的作用。在我们的实验中,我们使用血细胞特异性表达的UAS-GAL4系统,利用he-gal4在血细胞中特异性表达凋亡基因reaper,通过流式细胞术进行检测,这将是较为直观的检测果蝇血细胞的方法之一 (Yang等,2019)。 首先,通过前向 (FSC) 和侧向 (SSC),圈出果蝇血细胞的范围 (图2)。再根据我们采用的血细胞特异性表达GFP绿色荧光蛋白的表达水平检测果蝇的血细胞情况 (图3A)。同时在血细胞中表达凋亡基因reaper,可以特异性地敲除血细胞 (图3B)。我们可以利用该技术手段有效地检测果蝇中血细胞的含量。在血细胞中特异性表达凋亡基因后DAPI阳性的细胞也随之增高,血细胞数量减少。 图2. 通过前向 (FSC) 和侧向 (SSC) 圈出果蝇血细胞的范围 图3. 在血细胞中特异性表达凋亡基因reaper后,可有效敲除血细胞
溶液配方
致谢
感谢潘磊实验室以及中科院生化细胞所细胞分析技术平台全体成员的建议和帮助。该研究受国家自然基金 (31870887,31570897-潘磊)、(31670909-俞珺璟)和中国科学院青年创新促进会优秀会员 (潘磊) 的支持。本文实验方案改编自本实验室发表文章 (Yang 等,2019)。
参考文献
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