摘要:Naïve CD4+ T细胞在不同的条件下可诱导形成不同的CD4+ T细胞亚型,比如,Th1 (Szabo等,2002),Th2 (Mowen和Glimcher,2004;Flaherty和Reynolds,2015),Treg (Sekiya和Yoshimura,2016;Read等,2019),Th9 (Kaplan等2015),Th17 (Chung等,2009;Rumble和Segal, 2014)。不同CD4+ T细胞亚型表达特异的转录因子,具有不同的免疫学功能,特异转录因子表达是鉴定不同CD4+ T细胞亚群的关键指标。本实验以检测转录因子FoxP3+的CD4+ T细胞分析调节性T细胞Treg细胞比例为例,演示体外分化后CD4+ T细胞亚型转录因子的流式检测。
关键词: T 细胞分化, CD4+ T细胞亚型, Cytokines, 转录因子
材料与试剂
仪器设备
软件
实验步骤
用eBioscienceTM FoxP3/Transcription Factor Staining Buffer Set试剂盒进行CD4+ T细胞亚型转录因子的流式染色。染色体系为96孔U型板。
结果与分析
以Treg细胞的转录因子Foxp3为例,展示转录因子的流式染色 (图1)。 结果分析:纯化的naïve CD4+ T细胞是未分化的T细胞,在诱导形成FoxP3+的Treg细胞前是很少表达FoxP3的,诱导前的流式细胞染色仅有4% 的细胞是FoxP3+的。在向Treg细胞诱导4 d后。CD4+T细胞中有37% 的细胞表达FoxP3。该结果不仅说明该条件是可以定向诱导naïve CD4+ T细胞分化形成Treg细胞,也说明该检测转录因子的方法是有效的。 图1. 流式检测诱导前后Treg细胞的比例
失败经验
溶液配方
致谢
感谢杨选明实验室全体成员的建议和帮助。该研究受国家自然基金 (81671643)、科技部重点研发计划 (2016YFC1303400) 资助。
参考文献
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