实验原理:免疫荧光染色技术是基于具有荧光色素标记的特异性抗体和待测抗原进行结合,进而通过激光激发荧光色素来实现在组织和细胞中对某种特定蛋白的定性检测技术。本实验方法使用的第一抗体不作荧光标记,使用与第一抗体种属相同抗体的Fc段作为抗原免疫动物而制备的抗抗体,即第二抗体,并用荧光素标记第二抗体。反应时,特异性的第一抗体与细胞中相应的待测抗原反应结合,然后缓冲液洗掉未结合的第一抗体,再用荧光素标记的第二抗体与结合在抗原上的第一抗体结合,最终形成抗原—抗体—荧光抗体复合物。在激光扫描共聚焦显微镜下,通过相应波长的激光激发荧光素,从而接受信号形成图像。实验目的:检测某种特定蛋白在果蝇肠道细胞中的表达分布情况。
关键词: 果蝇, 肠道, 免疫荧光染色
材料与试剂
一、实验材料
二、溶液与试剂
仪器设备
实验步骤
一、第一天:解剖、固定、封闭
二、第二天:孵育二抗
溶液配方
致谢
该实验方案改编自首都师范大学马梅芳硕士毕业论文 (2016);使用该实验方案发表的文章:Li等,2013,2014;Ren等,2015;Ma等,2016。
参考文献
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