Nano-injection注射方法构建DCV果蝇感染模型

赵娅娅; 俞珺璟; 潘磊

doi:10.21769/BioProtoc.1010288

Improve Research Reproducibility A Bio-protocol resource

Nano-injection注射方法构建DCV果蝇感染模型

Using Nano-injection to Prepare Models of DCV Infected Drosophila

赵赵娅娅*

俞俞珺璟*

潘潘磊

*Contributed equally to this work 发表时间: 2019年06月20日 DOI: 10.21769/BioProtoc.1010288 浏览次数: 8140

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摘要：病毒是引发重大流行性传染病的源头之一。因此，深入解析病毒与宿主的相互作用，对于了解病毒的致病机理，进而寻找最优抗病毒方案具有重要的理论意义和实际应用价值。黑腹果蝇 (Drosophila melanogaster) 源于其同高等动物高度保守的天然免疫信号通路和其他模式生物无法比拟的遗传操作优势，已经被广泛应用于病原体和宿主的互作研究之中。特别是，对于虫媒传播的RNA病毒，果蝇已被证明是理想的宿主模式动物，发现了大量的保守的抗病毒天然免疫机制。本文将以DCV病毒为范例，详细描述如何通过定量显微注射的方法构建果蝇的病毒感染模型，并介绍评价该模型体系的经典指标和必须加以考虑的注意事项。

Keywords: 果蝇

DCV

Wolbachia

Nano-injection

材料与试剂

1.5 ml离心管 (Safe-Lock Tubes) (Eppendorf, catalog number: 0030120086)
1 ml注射器
KIMTECH纸
细胞培养皿
0.5 mm无菌陶瓷研磨珠
硼硅酸盐玻璃管 (3.5" Drummond #3-000-203-G/X 100 Replacement Tubes)
96孔板
果蝇培养管
野生型雄性雌性果蝇成虫
Schneider果蝇培养基
玉米粉
酵母粉
琼脂糖
氯化钙
蔗糖
葡萄糖
山梨酸钾
C₈H₈O₃
10 mM Tris-HCl缓冲液, pH 7.2
EDTA
SDS
异丙醇 (Sigma, catalog number: I9516)
70%酒精
醋酸钾溶液
无菌ddH₂O
矿物油 (Sigma, catalog number: M8410-500ML)
PCR试剂盒 (TAKARA，catalog number: R011)
10% FBS
四环素 (Sigma, catalog number: 87128)
四环素溶液 (见溶液配方)
正常果蝇食物 (见溶液配方)
溶液A (见溶液配方)

仪器设备

解剖镊子
PCR仪 (ABI 2720 Thermal Cycler)
LEICA S6体视显微镜
-80 °C冰箱
水浴锅
昆虫细胞培养箱
离心机 (Eppendof, model: 5424R)
研磨机器 (Minilys personal homogenizer - Bertin Instruments)
激光微电极拉制仪 (Sutter P-2000)
NANOJECT II (Drummond Scientific Company)

实验步骤

引用格式：赵娅娅, 俞珺璟, 潘磊. (2019). Nano-injection注射方法构建DCV果蝇感染模型. Bio-101: e1010288. DOI: 10.21769/BioProtoc.1010288.

下载引用格式

How to cite: Zhao, Y. Y., Yu, J. J. and Pan, L. (2019). Using Nano-injection to Prepare Models of DCV Infected Drosophila. Bio-101: e1010288. DOI: 10.21769/BioProtoc.1010288.

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