摘要:免疫电镜技术是将抗原抗体反应的特异性和电子显微镜的高分辨率相结合的在亚细胞和超微结构水平上对抗原进行定位分析的一种高精确度、灵敏的技术。本文将介绍用电子致密物质胶体金等标记抗体,然后让其与含有相应抗原的果蝇成虫复眼标本反应,以适宜电镜观察的方法处理该果蝇成虫复眼标本,观察时可见电子致密物质的所在位置,以在超微结构水平上识别抗原、抗体在果蝇成虫复眼的反应部位的免疫电镜方法。
关键词: 免疫电镜, 免疫标记, 电镜, 抗原抗体反应, 果蝇复眼
材料与试剂
仪器设备
实验步骤
注:未特殊标明的均为室温静置。 一、样品包埋 Day 1:
Day 2: (均置于4 °C冷房内)
Day 3: 包埋
二、切片 如图3所示,将包埋好的样品 (金字塔型) 在体视显微镜下切除部分多余的成分,修成相应的形状,顶面按照包埋成形后复眼所处的方向调整切片初始面角度 (修顶面时须把握好与样品之间的距离,太远会使得切片前期空片较多,太近易不小心切得暴露样品;此外,应尽量保证顶面平整,避免刀痕),底面用砂纸磨平,用502胶粘在圆柱形的塑料底座上,以方便上机切片。 切片:厚度100 nm,每个grid (此处为镍网)上放~5张切片。 图3. 包埋样品切片前修形示意图
三、染色 Part 1:
Part 2:
四、电镜观察 以80 kV上镜观察拍摄。图5为果蝇复眼免疫电镜结果图,图中展示了野生型果蝇的单个小眼。果蝇的单个小眼包含了七个感光细胞 (R1-R7/8),其中感光细胞R1-R6表达光受体Rh1。图中通过免疫电镜技术利用Rh1的抗体成功标记出在感光细胞R1-R6的细胞膜上 (白色虚线内区域显示了R细胞的细胞膜区域) 高度聚集的Rh1蛋白 (R1-R6细胞膜中的黑色小点)。 图5. 电镜观察结果示意图
溶液配方
致谢
该方法已用于发表文献 (Tian等, 2013)。
参考文献
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