摘要: 进食行为作为本能行为之一,与生物体的生存繁衍息息相关。以果蝇这一模式动物为研究对象,研究进食行为的神经、分子机制对理解和解决各种代谢紊乱和神经疾病有重要意义。 目前,多种方法和手段都被应用于研究果蝇的进食行为,它们可以从不同的层次和方面反映果蝇的进食特征 (Deshpande等,2014)。伸喙反应法 (PER),是通过统计果蝇伸喙反应的频率来表示果蝇对食物刺激的感知和摄取欲望 (Gordon和Scott,2009)。在进食量的测定上,比例粗估法 (PE) 通过统计检测群体中有摄食行为发生的果蝇数量百分比来反映进食量。染料法采用染料标记食物,通过测定染料的含量反映食物摄入量。同位素标记法是采用放射性同位素标记食物,测定同位素的含量来反映进食量。毛细玻璃管测定法 (CAFÉ) 通过测量液体食物在毛细玻璃管中的体积变化反应果蝇的摄入量。近年来,研究者还开发了FLIC、flyPAD、Expresso等通过转化的电信号来实现测定果蝇进食量的自动化方法 (Itskov等,2014;Ro等,2014;Yapici等,2016)。 比较广泛和简便应用的染料法 (Edgecomb等,1994;Wood等,2004),是用染料标记食物,用作进食量的检测。果蝇的进食量与染料的摄入量正相关,染料浓度与其吸光度成正比关系。使用分光光度法测定染料的浓度,由染料的浓度来反映果蝇在一定时间内的进食量。染料法测定进食量具有简便易行的优点,可以很好地反映一定时间内果蝇在自然状态下的固体食物中的进食量。 本方法以染料法为基础,通过给果蝇预喂不同的食物,实现对果蝇营养状态的控制,检测其在不同营养状态下的进食量。
关键词: 果蝇, 进食量, 染料法, 预喂范式
材料与试剂
仪器设备
软件
实验步骤
结果与分析
野生型果蝇经过蛋白食物的预喂,果蝇表现出显著降低的进食量 (图2),这一现象,我们定义为蛋白引起的进食抑制现象 (Protein-Induced Feeding Inhibition, PIFI) (Sun等,2017)。在蛋白营养感知突变体果蝇fit81中,预喂蛋白组的果蝇进食量维持较高水平。突变体的蛋白抑制指数与野生型果蝇相比具有显著差异。该结果是已发表论文中部分结果的独立重复。 图2. 野生型与突变体果蝇在预喂范式中进食结果. A. w1118 与fit81果蝇在预喂范式中的相对进食量。B. w1118 与fit81果蝇的抑制指数。n = 8,**P < 0.05,***P < 0.001,Student’s t-test.
注意事项
溶液配方
致谢
感谢刘畅,孙璟晗对该方法的贡献。感谢国家自然科学基金 (31571089、31730045) 对本工作的支持。本方法参见2017年已发表于Nature Communications的Drosophila FIT is a protein-specific satiety hormone essential for feeding control (Sun等,2017)。
参考文献
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