实验原理:PCR (polymerase chain reaction) 的原理是在模板DNA、引物和4种脱氧核糖核苷酸 (dNTP) 存在的条件下,依赖于DNA聚合酶的体外酶促合成反应。两个引物分别位于靶序列的两端,同两条模板的3'端互补,由此限定扩增片段。PCR反应由一系列的变性-退火-延伸反复循环构成,即在高温下模板双链DNA变性解链,然后在较低的温度下同过量的引物退火,再在适中的温度下由DNA聚合酶催化进行延伸。由于每一循环的产物都可作为下一循环反应的模板,因此扩增产物的量呈指数级增加。PCR之后通过胶回收得到纯化的目的基因片段,连接到克隆载体质粒中,转入大肠杆菌细胞,质粒随着大肠杆菌细胞的快速繁殖也快速复制,富集大肠杆菌细胞抽提质粒即可得到大量的克隆质粒。 实验目的:通过PCR扩增目的基因片段,并利用大肠杆菌转化获得单克隆质粒,用于测序、基因序列分析、特异探针构建及后续表达载体构建。
关键词: PCR, 大肠杆菌, 转化, 克隆, 质粒
材料与试剂
仪器设备
实验步骤
注意事项
溶液配方
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