Search

柑橘花粉活力鉴定   

How to cite Favorites Q&A Share your feedback Cited by

Original research article

A brief version of this protocol appeared in:
Rice Protocol e-book

实验原理及目的:在育种过程中,花粉的质量和数量直接影响育种的成败,因此花粉活力的鉴定显得尤为重要。花粉的活力可直接影响产量,有活力的花粉会被醋酸洋红和氯化三苯四氮唑 (TTC) 染成红色,被碘-碘化钾 (I-IK) 染成蓝紫色。

关键词: 育种, 花粉活力, 染色

材料与试剂

  1. 载玻片
  2. 吸管
  3. 盖玻片
  4. 滤纸
  5. 量筒
  6. 棕色瓶
  7. 柑橘花粉
  8. 柑橘花药
  9. 碘化钾
  10. 蒸馏水

  11. TTC
  12. 1%醋酸洋红 (见溶液配方)

仪器设备

  1. 毛笔
  2. 镊子
  3. 万能显微镜 (Olympus, model: BX61) 
  4. 电子天平

实验步骤

  1. 醋酸洋红染色法
    1.1
    在载玻片上用吸管滴一滴1%醋酸洋红,用毛笔轻蘸烘干的柑橘花粉,轻轻洒在醋酸洋红上。
    1.2
    盖上盖玻片,盖时用镊子夹住盖玻片一角,使之倾斜与载玻片呈30-45°,缓慢放下盖玻片,防止气泡产生,并用滤纸吸干多余的醋酸洋红。
    注:盖盖玻片时,若产生气泡会影响显微镜观察和拍照,多余的醋酸洋红会使花粉移动,也不利于显微镜观察和拍照。
    1.3
    染色一分钟后,于万能显微镜下观察拍照。每个品种3-4个重复,每个重复选取多个视野拍照,保证总花粉数多于500个。用软件Image J统计花粉染色数量与总的花粉数量,计算比值即为花粉活力。
  2. I-IK染色法:此方法适用于不含淀粉的不育花粉,只染成蓝紫色表明花粉发育良好、活性强,呈黄褐色为发育不良的花粉。
    2.1
    取1 g的碘化钾溶于10 ml蒸馏水中,然后加入0.5 g碘,待全部溶解后,再加蒸馏水至200 ml,配好试剂后,置于棕色瓶中备用。
    2.2
    将一滴I-IK溶液滴在载玻片上,用毛笔均匀撒上花粉,盖盖玻片,放置1-2 min进行统计,方法同醋酸洋红染色法。
  3. TTC染色法:具有生命力的生物体在脱氧酶催化的氧化还原反应中,把氧转移给TTC,使其生成红色的苯甲潜 (TTFC),因此,凡染为红色的花粉粒是具有活力 的,呈淡红色的活力较低,无色的是没有生命力的。
    3.1
    用镊子在载玻片上放10粒花药,滴蒸馏水1-2滴,用镊子夹出花药,清除花药壁后,滴0.5% TTC 1-2滴,盖上盖玻片,于黑暗中染色30 min。
    3.2
    每个处理做1-3个重复,染色完毕后显微镜下观察着色情况。每个重复选取6个视野拍照,进行统计,方法同醋酸洋红染色法。

溶液配制

  1. 1%醋酸洋红
    洋红1 g,45%醋酸100 ml,煮沸2 h左右,并不断补充蒸馏水,保证其总体积不变,之后冷却过滤,加入4%铁明矾 (硫酸铁铵) 溶液1-2滴 (不能加多,否则会发生沉淀),放入棕色瓶中常温保存备用
Copyright: © 2018 The Authors; exclusive licensee Bio-protocol LLC.
引用格式:王淑明, 郭文武. (2018). 柑橘花粉活力鉴定. Bio-101: e1010193. DOI: 10.21769/BioProtoc.1010193.
How to cite: Wang, S. M. and Guo, W. W. (2018). Identification of Citrus Pollen Vitality . Bio-101: e1010193. DOI: 10.21769/BioProtoc.1010193.
Q&A

Please login to post your questions/comments. Your questions will be directed to the authors of the protocol. The authors will be requested to answer your questions at their earliest convenience. Once your questions are answered, you will be informed using the email address that you register with bio-protocol.
You are highly recommended to post your data including images for the troubleshooting.

You are highly recommended to post your data (images or even videos) for the troubleshooting. For uploading videos, you may need a Google account because Bio-protocol uses YouTube to host videos.