材料与试剂

1. 液氮 (湖北省畜牧局制氧厂)
   
2. 焦碳酸二乙酯 (DEPC, Sigma D5758)
   
3. TRIzol (Invitrogen公司)
   
4. 苯酚:氯仿:异戊醇 (体积比25:24:1)或氯仿 (国药试剂，分析纯)
   
5. 异丙醇 (国药试剂，分析纯)
   
6. 无水乙醇或95%乙醇 (国药试剂，分析纯)
   
7. 75%乙醇：用95%乙醇和0.1‰ DEPC处理水配制
   
8. TE缓冲液
   
9. 0.1‰ DEPC处理水 (见溶液配方)
   

仪器设备

1. 研钵和研磨棒
   
2. 移液器：1 ml、200 μl、20 μl、10 μl、2.5 μl (eppendorf)
   
3. 枪头及配套枪头盒：1 ml、200 μl、20 μl (AXYGEN)
   
4. 离心管和配套管架：1.5 ml (AXYGEN)
   
5. 试剂瓶：250 ml
   
6. 50 ml离心管：分装氯仿、异丙醇和酒精
   
7. 4 °C冷冻离心机(eppendorf Centrifuge 5417R)
   
8. 紫外分光光度计：Nanodrop(Thermo Fisher)
   注：器具处理与准备
   1)

   塑料制品：(包括枪头、EP管等)：新枪头和离心管(经伽玛射线灭菌)可直接使用，已开封枪头和离心管经高温高压灭菌后使用。
   
   2)

   玻璃制品：新试剂瓶需酸泡过夜，冲洗干净，0.1‰ DEPC处理水浸泡后盖上锡纸，180 °C，2 h。
   
   
   

实验步骤