果蝇胚胎收集和脱壳处理

材料与试剂

1. 84消毒液（江苏爱特福84股份有限公司，爱特福）
2. 果蝇胚胎收集笼（Genesee Scientific 科技公司，Genesee Scientific，Genesee# 59-101）
3. 胚胎收集器（漏斗）：（Corning公司，FALCON，REF352350，70 μm，Nylon）
4. 遮光布
5. 昆虫解剖针（塑料柄）：（泰州市思齐教学仪器有限公司，思齐，JPZZ，长14.5 cm，针尖直径0.1 mm）
6. 90 cm培养皿（上海泰坦科技股份有限公司，Titan/泰坦，货号：02036583）
7. 载玻片（SAIL BRAND（帆船牌），catalog number: 7105）
8. 玉米粉（黑龙江北纯农产品开发有限公司，北纯）
9. 大豆粉（黑龙江北纯农产品开发有限公司，北纯）
10. 蔗糖（白砂糖）（国药集团化学试剂有限公司，沪试，货号：10021463）
11. 麦芽糖（上海畅硕生物科技有限公司，畅硕）
12. 高活性干酵母（高糖型）（英联马利（北京）食品销售有限公司，梅山）
13. 琼脂粉（上海益启生物科技有限公司，Sigma，货号:A1296-1KG）
14. 对羟基苯甲酸甲酯（也称尼泊金甲酯）（国药集团化学试剂有限公司，沪试，货号：30119416）
15. 苯甲酸钠（国药集团化学试剂有限公司，沪试，货号：30164817）
16. 丙酸（国药集团化学试剂有限公司，沪试，货号：81011918）
17. 无水乙醇（国药集团化学试剂有限公司，沪试，货号：10009218）
18. 葡萄汁（味全食品工业股份有限公司，味全）
19. 培养基板（见溶液配方）
20. 葡萄汁板（见溶液配方）

仪器设备

1. 恒温恒湿培养箱（宁波江南仪器厂，宁波江南，型号：HWS-500）
2. 体视显微镜（Olympus生物显微镜公司，Olympus，型号：SZ61）
3. 微波炉（广东格兰仕微波生活电器制造有限公司，格兰仕，型号：P70F23P-G5(S0)）
   

实验步骤

一、 胚胎收集

1. 将准备好的果蝇放入遮光布遮光的胚胎收集笼中（见图1a 未遮光；b 遮光），在黑暗环境中果蝇产卵率高。
   
   
   图1. 胚胎收集笼（a）未遮光；（b）遮光
   
   
2. 培养基板驯化1-2 d。
3. 在葡萄汁板上涂酵母膏收集果蝇卵。
4. 产卵30 min后用湿润细毛刷将胚胎从葡萄汁板上轻轻刷下，800个左右。
5. 用自来水冲洗，倒入胚胎收集器（漏斗）中，流速2 mL/S（见图2）。
   
   
   图2. 胚胎收集.
   
   
6. 用自来水冲洗30 s，流速2 mL/S。
7. 用纯净水冲洗30 s，流速2 mL/S。

不需要脱壳处理的就可以直接使用。脱壳处理根据实验需求有两种方法：
二、 胚胎脱壳

1. 用于显微注射
   使用过程中加水保湿（见图3）。
   
   
   图3. 胚胎保湿
   
   
2. 用于DNA、RNA提取、有特殊要求的显微注射等
   
   
   图4. 果蝇胚胎（a）未脱壳；（b）脱壳

溶液配方

1. 果蝇培养基板配制：
   1. 果蝇培养基原料种类：玉米粉，大豆粉，蔗糖（白砂糖），麦芽糖，高活性干酵母（高糖型），琼脂粉，防腐剂（对羟基苯甲酸甲酯也称尼泊金甲酯、苯甲酸钠、丙酸等），所有原料均需妥善保管，有条件都4 °C冷藏。
   2. 果蝇培养基配方：名称：玉米粉果蝇培养基，成分如下表，防腐剂特殊实验可不加。
      

      玉米粉果蝇培养基（总体积1L）
      成分名称	质量（克/g）
      玉米粉	66.825
      大豆粉	9.18
      蔗糖（白砂糖）	40
      麦芽糖	42.4（用125 mL水化开后加入）
      酵母	25
      琼脂粉	6
      防腐剂(对羟基苯甲酸甲酯也称尼泊金甲酯）	0.25（用2.5 mL 95%乙醇溶解后加入）
      防腐剂（苯甲酸钠）	1
      防腐剂（丙酸）	6.875 mL（温度降至60℃～70℃加入）

      
      
   3. 小量培养基配制方法：煮沸法（500 mL）
      1)

      按配方称取玉米粉、大豆粉、蔗糖、麦芽糖、酵母、琼脂粉放到烧杯中，加水至500 mL，搅拌混匀，放入微波炉加热。
      2)

      中间需要搅拌混匀2-3次，防止玉米粉等糊底，彻底煮沸后反复沸腾2-3次。
      3)

      培养基温度降到60 °C -70 °C时添加防腐剂，搅拌均匀。
      4)

      用培养皿分装，15 mL/皿。
      5)

      盖好盖子，待冷却凝固后4 °C冷藏备用。
      6)

      在2-3周内用完。
2. 葡萄汁板配制
   水150 mL，葡萄汁150 mL，蔗糖4.8 g，琼脂粉6.8 g。
   1. 先在烧杯里加150 mL水，加入6.8 g琼脂粉，放微波炉加热。
   2. 煮沸后搅拌均匀，再煮沸，重复3次。
   3. 加入蔗糖煮沸。
   4. 加入150 mL葡萄汁，煮沸。
   5. 用培养皿分装，15 mL/皿。
   6. 盖好盖子，待冷却凝固后4 ℃冷藏备用。
   7. 尽量在两周内用完。

致谢

感谢中华人民共和国科学技术部2021YFA0805800和中国科学院的支持。
感谢中国科学院分子细胞科学卓越创新中心公共技术中心果蝇资源与技术平台的工作和经费支持。

参考文献

1. 吴薇. (2016). 果蝇显微注射系统优化的研究. 生物技术世界, 6: 11-12.

Copyright: © 2023 The Authors; exclusive licensee Bio-protocol LLC.

引用格式：沈妍, 徐龙梅, 吴薇. (2023). 果蝇胚胎收集和脱壳处理. // 实验动物胚胎操作实验手册. Bio-101: e1010977. DOI: 10.21769/BioProtoc.1010977.
How to cite: Shen, Y., Xu, L. M., and Wu, W. (2023). Collection and Hulling treatment of Drosophila’s embryos. // Embryo Manipulation Manual of Laboratory Animals. Bio-101: e1010977. DOI: 10.21769/BioProtoc.1010977.