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A Simple Device for Surface Sterilization of Plant Tissues   

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摘要:利用七根玻璃管和铜网来提高植物的表面消毒效果,既解决了传统方法处理样品量较少,处理样品种类不多,操作方法不够简便而耗时多等技术问题;又大大提升了处理多个不同种样品的效率,增加了表面消毒所需药品的利用率,提高了空间利用率,减少了样品损失且使表面消毒更彻底。

关键词: 植物组织, 表面消毒, 简易装置

材料与试剂

  1. 橡皮筋
  2. 无菌滤纸
  3. 标签纸
  4. 无菌水
  5. 75%乙醇
  6. 2%次氯酸钠
  7. 90%乙醇

仪器设备

  1. 玻璃管:7个;上下端口均不封口;内径2.5 cm,外径3 cm,高16 cm
  2. 外容器:内径13 cm,外径14 cm,高18 cm,容量1.85 L
  3. 铜网:圆形;直径15 cm,目数为20 目
  4. 橡皮塞 (规格:大口 × 小口 × 高度 (mm):26 × 19 × 28)
  5. 镊子
  6. 剪刀
  7. 超净工作台

实验步骤

一、表面消毒简易装置的组装

  1. 七个玻璃管1的上端开口均通过橡皮塞5进行对应的密封 (如图1B)。
  2. 所有玻璃管1排列成图1D所示,然后通过橡皮筋4捆扎成束,下端开口处通过一张铜网3 (如图1C) 进行统一捆扎封底 (如图1A)。
  3. 将玻璃管束置入外容器2内 (如图1D)。

二、三种实际操作方式

  1. 准备四个本实用新型装置的外容器2的操作过程 (如图2所示):
    1.1
    将样品用无菌水清洗,分拣并修剪好,用镊子将样品放入玻璃管1内 (一套装置可放入一种或七种以下的植物样品),在玻璃管1对应的橡皮塞5上贴上写有样品名称或编号的标签,以橡皮筋4将七根玻璃管1固定好。
    1.2
    在四个外容器2中分别加入75%乙醇,2%次氯酸钠,90%乙醇和无菌水 (加入的量以没过玻璃管1内的样品为准)。
    1.3
    手持玻璃管束 (七根玻璃管1),将其浸入75%乙醇中,浸泡30~60 s,期间以手将玻璃管束提起放下2~3次,然后用无菌水冲洗2~3次。
    1.4
    将玻璃管束转移到装有2%次氯酸钠的外容器2中,浸泡6~10 min,期间以手将玻璃管束提起放下数次。


    图1. 表面消毒简易装置的组装


    图2. 实际使用时的一种示意图

    1.5
    将玻璃管束转移到装有90%乙醇的外容器2中,浸泡30~60 s,期间以手将玻璃管束提起放下2~3次。
    1.6
    将玻璃管束转移到装有无菌水的外容器2中,更换三次无菌水,取出玻璃管束后将玻璃管束放在无菌滤纸上控干多余水分。
  2. 准备一套本实用新型装置的操作过程 (如图3所示):
    2.1
    将样品用无菌水清洗,分拣并修剪好,用镊子将样品放入玻璃管1内 (一套装置可放入一种或七种以下的植物样品),在玻璃管1对应的橡皮塞5上贴上写有样品名称或编号的标签,以橡皮筋4将七根玻璃管1固定好。
    2.2
    在外容器2中都加入75%乙醇 (加入的量以没过玻璃管1内的样品为准),将玻璃管束浸入75%乙醇中,浸泡30~60 s,期间以手将玻璃管束提起放下2~3次,然后用无菌水冲洗2~3次。


    图3. 实际使用时的另外一种示意图

    2.3
    将外容器2中液体更换为2%次氯酸钠 (加入的量以没过玻璃管1内的样品为准),令玻璃管束在外容器2中浸泡6~10 min,期间以手将玻璃管束提起放下数次。
    2.4
    将外容器2中液体更换为90%乙醇 (加入的量以没过玻璃管1内的样品为准),令玻璃管束在外容器2中浸泡6~10 min,期间以手将玻璃管束提起放下数次。
    2.5
    将外容器2中液体更换为无菌水 (加入的量以没过玻璃管1内的样品为准),更换三次无菌水,取出玻璃管束后将玻璃管束放在无菌滤纸上控干多余水分。

  3. 准备四套本实用新型装置的操作过程 (如图4所示) (可根据实验的需要可以自行增加本实用新型装置的套数):
    3.1
    将样品用无菌水清洗,分拣并修剪好,用镊子将样品放入玻璃管1内 (一套装置可放入一种或七种以下的植物样品),在玻璃管1对应的橡皮塞5上贴上写有样品名称或编号的标签,以橡皮筋4将玻璃管1每七个一组固定成束。
    3.2
    在四个外容器2中都加入75%乙醇 (加入的量以没过玻璃管1内的样品为准),将四组玻璃管束浸入75%乙醇中,浸泡30~60 s,期间以手将每组玻璃管束提起放下2~3次,然后用无菌水冲洗2~3次。
    3.3
    将四个外容器2中液体都换做2%次氯酸钠 (加入的量以没过玻璃管1内的样品为准),令玻璃管束在外容器2中浸泡6~10 min,期间以手将各组玻璃管束提起放下数次。
    3.4
    将四个外容器2中液体都换做90%乙醇 (加入的量以没过玻璃管1内的样品为准),将四组玻璃管束浸入90%乙醇中,浸泡30~60 s,期间以手将每组玻璃管束提起放下2~3次。
    3.5
    将四个外容器2中液体都换做无菌水 (加入的量以没过玻璃管1内的样品为准),更换三次无菌水,取出玻璃管束后将玻璃管束放在无菌滤纸上控干多余水分。

结果与分析

传统方法 (如图 5所示) 与使用本装置进行表面消毒所用时间做了对比。结果如下表:可知该表面消毒的简易装置大大提升了处理不同种样品的效率 (表1)。


图4. 实际使用时的再一种示意图

表1. 传统方法与使用本装置进行表面消毒所用时间的对比表


注:
1.每种样品的量按本实用新型装置所能容纳的最大容量来计;
2.操作方式三按四套本实用新型装置的饱和容量计,即处理的样品量四倍于其他方式。


图5. 传统方法步骤示意图

致谢

感谢基本科研业务费项目"筛选新型植物耐盐真菌及制剂创新的关键技术问题研究" (编号: RISP2013005, 2013-2016) 对本研究的大力支持

参考文献

  1. 袁志林,潘雪玉,秦媛. (2016). 植物组织表面消毒的简易装置. 浙江: CN205093317U.
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Copyright: © 2021 The Authors; exclusive licensee Bio-protocol LLC.
引用格式:张宇薇, 杨预展, 袁志林, 潘雪玉, 秦媛. (2021). 一种简易的植物组织表面消毒装置. // 微生物组实验手册. Bio-101: e2003662. DOI: 10.21769/BioProtoc.2003662.
How to cite: Zhang, Y. W., Yang, Y. Z., Yuan, Z. L., Pan, X. Y. and Qin, Y. (2021). A Simple Device for Surface Sterilization of Plant Tissues. // Microbiome Protocols eBook. Bio-101: e2003662. DOI: 10.21769/BioProtoc.2003662.
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