摘要:酵母细胞表面展示是一种固定化表达异源蛋白的真核展示系统,在文库筛选、生物吸附、免疫检测和生物传感器研发等领域发挥重要作用。外源蛋白通过酿酒酵母a凝集素展示在细胞表面。a凝集素包含核心亚基AGA1及结合亚基AGA2。AGA1与酵母细胞壁β-葡聚糖共价连接,并通过两个二硫键与AGA2的N端共价相连。外源蛋白与AGA2的C端融合,从而实现外源蛋白在酿酒酵母细胞的表面展示。本实验通过AGA1和AGA2将外源蛋白固定在酵母细胞表面,获得菌酶一体化的微生物细胞反应器。
关键词: a凝集素, 外源蛋白, 表面展示, 酿酒酵母
材料与试剂
仪器设备
实验步骤
一、 重组pYD1表达载体的构建
二、 酿酒酵母感受态制备
三、 LiAc转化法
四、 支架蛋白的表面展示
溶液配方
致谢
国家重点研发计划重点专项子课题“农副产品利用与饲料资源开发技术集成与应用” (2018YFD0501903)
参考文献
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