研究背景

赤眼蜂和缨小蜂科昆虫是生物防治研究领域中使用非常广泛的两类卵寄生性昆虫，尤其是赤眼蜂科中松毛虫赤眼蜂 (Trichogramma dendrolimi)，螟黄赤眼蜂 (Trichogramma chilonisIshii) 以及暗黑赤眼蜂 (Trichogramma pintoi Voegele) 等赤眼蜂属Trichogramma昆虫已实现人工扩繁且有效地应用于害虫的生物防治中。由于这两类昆虫体型微小，仅靠形态分类难以对近缘种、隐存种等进行准确的分类鉴定，同时有关其分子水平的研究也较少。本文主要介绍DNA无损伤提取法在赤眼蜂和缨小蜂DNA条形码研究中的应用，并总结了室内研究缨小蜂生物学特征的方法。

材料与试剂

一、标本采集与制作

1. 封口袋
2. 2 ml冻存管
   
3. 橡皮筋
4. 滤纸
5. 吸管
6. 脱脂棉
7. 保鲜膜
8. 15%蜂蜜水
9. 无水乙醇，分析纯500 ml (天津永晟精细化工有限公司等)
10. 5%氢氧化钾，分析纯500 g (天津市盛奥化学试剂有限公司等)
11. 木榴油，20 ml (湖北泰辰健瑞药业有限公司等)
12. 丁香油，100 ml (国药集团化学试剂有限公司等)
13. 中性树胶，100 g (中国上海标本模型厂等)
14. 加拿大树胶，100 ml (Chemsworth，印度CAS8007-47-4)
15. 昆虫胶
16. 樟脑丸
    
    

二、DNA提取

1. Tween-20
2. DNA分子量标准 (100-2,000 bp)
3. NP-40
4. Taq DNA聚合酶
5. Master mix Taq酶DNA聚合酶
6. DNA marker
7. 蛋白酶K (Omega公司等)
8. PCR回收试剂盒 (Omega公司等)
9. 琼脂糖
10. 引物合成及测序均由上海生工完成
11. 电泳缓冲液
    

仪器设备

一、玻片标本采集与制作

1. 捕虫网
2. 马氏网
3. 收集瓶
4. 记号笔
5. 冷冻干燥盒
6. 95 mm玻璃培养皿
7. 200 × 40 mm玻璃试管
8. 200目尼龙纱网
9. 解剖针
   
10. 镊子
11. 20 × 20 mm盖玻片，厚0.13-0.17 mm (上海工业玻璃四厂等)
12. 25.4 × 76.2 mm载玻片，厚1-1.2 mm (帆船牌等)
13. 三角片
14. 1-5号昆虫针
15. 标本盒
16. 体视显微镜 (Nikon SMZ 745T)
17. 生物显微镜 (Nikon Ni-E)
18. 台式烘箱 (303-0型)
    
    

二、DNA提取

1. 梯度PCR仪 (美国ABI等)
2. 高速低温离心机 (Beckman 等)
3. 电泳仪 (北京六一等)
4. 水平电泳槽 (北京六一等)
5. 凝胶成像仪 (Bio-Rad 等)
6. 振荡器 (IKA 等)
7. 恒温水浴锅 (江苏金怡仪器科技有限公司等)
8. 小型台离心机 (上海安亭科学仪器厂等)
   
   

三、生物学特征及形态鉴定研究

1. 光照培养箱 (江南仪器制造厂等)
2. 体视显微镜 (Nikon等)
3. 光学显微镜+DS-U3成像系统 (Nikon等)
   

实验步骤