适用说明:本文档为用于Illumina平台的KAPA RNA HyperPrep试剂盒加上RiboErase(HMR 人/小鼠/大鼠)Globin提供一份详细的实验方法。
产品描述
用于Illumina测序平台、KAPA RNA HyperPrep试剂盒加RiboErase(HMR)Globin包含去除rRNA和球蛋白mRNA转录物以及从25 ng-1 μg纯化的血源总RNA中构建Stranded RNA-Seq文库所需的所有缓冲液和酶,具体步骤如下:
该试剂盒提供了用于反应纯化的KAPA纯化磁珠,以及rRNA和球蛋白mRNA去除、cDNA合成、文库构建和扩增所需的所有酶和缓冲液。 反应缓冲液以方便的形式提供,包含所有需要的反应组分。这最大限度地降低了RNA酶污染的风险,确保了反应组分的一致性和均质性,并改善了重复样本之间的均一性。类似地,文库构建过程的每一个步骤都配有单独的酶混合物,从而减少了移液步骤的次数。 为了使序列覆盖均一性最大化,并维持相对的转录本丰度,尽量减少文库扩增偏差是至关重要的。KAPA HiFi DNA聚合酶是为低偏差高保真PCR而设计,是NGS文库扩增的首选聚合酶1, 2, 3, 4。KAPA RNA HyperPrep试剂盒加RiboErase(HMR)Globin包含用于文库扩增的KAPA HiFi热启动高保真酶预混液(2X)和文库扩增引物混合物(10X)。
产品应用
KAPA RNA HyperPrep试剂盒加RiboErase(HMR)Globin可用于手动操作或自动化操作,为总量为25 ng-1 μg的RNA进行NGS文库构建。该试剂盒可用于去除细胞质rRNA(5S、5.8S、18S和28S)和线粒体rRNA(12S和16S)及球蛋白mRNA转录物。该实验方法适用于多种类型的RNA测序应用,包括:
● 高质量和低质量RNA样本的基因表达分析; ● 单核苷酸多态性(SNV)分析; ● 剪切点和基因融合突变识别;以及 ● PolyA和非PolyARNA的表征,包括非编码和未成熟的RNA。
该试剂盒与长度 < 100 bp的小RNA不兼容。
工作流程图
实验操作流程
使用过本产品的部分文献
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