适用说明:本说明书适用于KAPA DNA HyperPrep文库构建试剂盒(07962312001、07962347001和07962363001),也适用于无PCR扩增流程的KAPA DNA HyperPrep文库构建试剂盒(07962339001、07962355001和07962371001)。(07962339001、07962355001和07962371001)。
友情提示: 1)本文档中的页码,附录均指原说明书中的页码及附录; 2)本文档包含原说明书中的产品描述,产品应用及实验操作流程、故障排查等主要信息,欲了解关于本产品详细说明及信息,建议参考原说明书 (点击面板上“下载PDF”可下载)。
产品描述
KAPA DNA HyperPrep文库构建试剂盒提供了一种灵活、操作简化的实验方法,用于从片段化的双链DNA(dsDNA)开始的快速构建Illumina测序文库。新型化学法和简化的单管工作流程提高了不同类型和起始量的DNA样本中进行文库构建的效率和一致性。 该工作流程结合了酶促步骤,并采用最少的基于磁珠的纯化,从而将样本处理和整个文库制备时间缩短至2-3小时。该试剂盒包含以下所需的所有酶和反应缓冲液:
该试剂盒为两个文库构建步骤中的每一步提供单一的浓缩缓冲液和单一的酶的混合物。从而提供了最佳的产品稳定性、简易度和效率的组合。但不包括接头以及连接和文库扩增后纯化所需的磁珠。KAPA纯化磁珠和KAPA接头是单独出售的。 为了使序列的覆盖均一性最大化,将文库扩增偏差控制到最小是至关重要的。KAPA HiFi DNA聚合酶是专为低偏差、高保真度PCR设计的,也是NGS文库扩增的首选试剂1,2,3,4。 KAPA DNA HyperPrep文库构建试剂盒包括KAPA HiFi热启动高保真酶预混液(2X),是一种随时可使用的包含了文库扩增所有组分的PCR混合物(不包括引物和模板)。试剂盒还包括了文库扩增混合引物(10X),是设计用于两侧含有P5和P7 Illumina流动槽序列的文库的高效扩增。没有扩增模块的试剂盒(KK8501、KK8503和KK8505)可用于无PCR扩增流程。它们还可以与KAPA HiFi实时文库扩增试剂盒(KK2701和KK2702)或KAPA HiFi Uracil+热启动高保真酶预混液(KK2801和KK2802)结合用于扩增亚硫酸氢盐转化的文库。
产品应用
KAPA DNA HyperPrep文库构建试剂盒非常适用于低通量和高通量NGS文库构建工作流程,这些工作流程需要进行末端修复、加A尾、接头连接和文库扩增(可选)。该试剂盒设计用于从各种类型和起始量(1 ng-1 μg)的DNA样本开始构建文库,兼容复杂的基因组DNA、细胞游离DNA/循环肿瘤DNA和低质量DNA(如FFPE)。对于小基因组、细胞游离DNA/循环肿瘤DNA和较低复杂性的样本(如ChIP DNA)、扩增子或cDNA(用于RNAseq),可以尝试低起始DNA(~100 pg或更多)进行文库构建。 该实验方法是自动化友好的,可以整合到一系列NGS应用的工作流程中,包括:
● 全基因组,鸟枪法测序 ● 全外显子或靶向测序,使用Roche SeqCap EZ、Agilent SureSelect、Illumina TruSeq或IDT xGen Lockdown探针,或其他杂交捕获系统 ● 染色质免疫共沉淀测序 ● RNA-seq(从cDNA开始) ● 甲基化测序(结合KAPA HiFi Uracil+热启动高保真酶预混液进行文库扩增)。
工作流程图
实验操作流程
注意:该实验方法不包括片段选择。有关双侧片段选择实验方法的详细信息,请参阅原说明书附录1。
使用过本产品的部分文献
If you have any questions/comments about this protocol, you are highly recommended to post here. We will invite the authors of this protocol as well as some of its users to address your questions/comments. To make it easier for them to help you, you are encouraged to post your data including images for the troubleshooting.