适用说明:本文档适用于Illumina平台的KAPA文库定量试剂盒(07960166001、07960140001、07960204001、07960255001、07960336001和07960298001)、Illumina平台的KAPA文库定量引物和PCR混合物试剂盒 (07960441001、07960484001、07960522001、07960727001和07960573001)、Illumina平台的KAPA文库定量标准品和引物试剂盒(07960085001)、Illumina平台的KAPA文库定量标准品试剂盒(07960409001和07960409001)、Illumina平台的KAPA文库定量稀释对照试剂盒(07960417001)和Illumina平台的KAPA文库定量引物试剂盒(07960093001)。 友情提示:本文档包含原说明书中的产品描述,产品应用及实验操作流程、故障排查等主要信息,欲了解关于本产品详细说明及信息,建议参考原说明书 (点击面板上“下载PDF”可下载)。
产品描述
Illumina平台的KAPA文库定量试剂盒提供了基于qPCR的Illumina文库绝对定量所需的全部试剂,这些文库两端带有P5和P7流动槽寡核苷酸序列。试剂盒包含:
● 文库定量DNA标准品1-6(线性、452 bp模板的10倍稀释系列) ● Library Quantification Primer Premix 文库定量引物预混液(10x),含有以下引物: 引物1:5'-AAT GAT ACG GCG ACC ACC GA-3' 引物2:5'-CAA GCA GAA GAC GGC ATA CGA-3' ● KAPA SYBR® FASTqPCR预混液(2x),含有各种被动参比染料(表1)。
表1. 推荐用于KAPA SYBR FAST通用qPCR预混液的ROX浓度
文库定量的方法为:通过使用KAPA SYBR FASTqPCR预混液和靶向Illumina P5和P7流动槽寡核苷酸序列的引物,使用qPCR扩增一组六份预稀释的DNA标准品和稀释的文库样本,进行文库定量。将每份DNA标准品的平均Cq值取log10(以pM表示浓度)作图,以生成标准曲线。然后使用绝对定量,通过标准曲线计算稀释的文库样本的浓度。 KAPA文库定量试剂盒经过严格测试,以确保最小的批次间差异。该试剂盒包含新型KAPA SYBR FAST DNA聚合酶,一种通过定向进化工程优化,适用于SYBR Green I的高性能qPCR酶。工程优化的聚合酶能够以相似的效率扩增多种DNA片段,因此能够使用通用的标准品可靠地定量平均片段长度最高达1 kb的所有Illumina文库,无需考虑文库类型和GC含量。 KAPA SYBR FAST是一种抗体介导的热启动 DNA聚合酶制剂。因此,KAPA文库定量试剂盒适用于自动化液体处理系统,进行高通量样品定量。
产品应用
Illumina平台的KAPA文库定量试剂盒旨在为准备Illumina测序的文库进行准确和可重复的定量。只要文库的浓度 > 0.0002 pM,且含有与引物预混液(10x)中的引物互补的序列,无论哪种文库类型、文库构建方式和使用哪种Illumina测序设备,均可以使用该试剂盒进行定量。 该试剂盒可定量GC含量高和平均片段长度高达1 kb的文库。 除了NGS文库定量,该试剂盒还可用于检测Illumina文库构建过程中的工作场所的文库污染。 KAPA文库定量检测包括可以轻易实现自动化的重复移液步骤。强烈推荐将自动化液体处理系统用于高通量NGS处理流程。有关更多信息,请参阅原说明书KAPA文库定量技术指南。
工作流程图
实验操作流程
使用过本产品的部分文献
If you have any questions/comments about this protocol, you are highly recommended to post here. We will invite the authors of this protocol as well as some of its users to address your questions/comments. To make it easier for them to help you, you are encouraged to post your data including images for the troubleshooting.