适用说明:本说明书适用于KAPA HiFi Uracil+ 热启动高保真酶预混液PCR试验盒 【KK2800(07959044001), KK2801(07959052001)及 KK2802 (07959079001)】。 友情提示:本网页说明书包含原说明书中的产品描述,产品应用及实验操作流程、故障排查等主要信息,欲了解关于本产品详细说明及信息,建议参考原说明书 (点击面板上“下载PDF”可下载)。
产品描述
KAPA HiFi HotStart是一种新型B族DNA聚合酶,经过生物加工增加了对DNA的亲和力,无需借助辅助蛋白或DNA结合域。与野生型B族DNA聚合酶和聚合酶混合物相比,这种酶固有的高延伸能力,能显著改善产量、催化速度和灵敏度。当用于新一代测序(NGS)文库扩增时,KAPA HiFi 热启动高保真DNA聚合酶的产量高,扩增误差小,序列覆盖均一性极高。 校正DNA聚合酶的预读功能会检测模板链中的促诱变尿嘧啶残基,并防止进一步的链延伸,从而减少或完全抑制PCR扩增。在KAPA HiFi Uracil+ 热启动高保真DNA聚合酶中,这种尿嘧啶结合袋被灭活,使其可以扩增含尿嘧啶的DNA。该酶显示出了与未修饰的KAPA HiFi 热启动 DNA聚合酶相同的高产量、低GC偏差和覆盖均一性,使其在使用亚硫酸氢盐DNA转化的应用时特别有优势,此时通常会产生低浓度的AT含量高的DNA。 KAPA HiFi Uracil+ 热启动高保真DNA聚合酶具有5′→3′聚合酶和3′→5′外切核酸酶(校正)活性,但没有5′→3′外切核酸酶活性。强大的3′→5′核酸外切酶活性在DNA扩增过程中带来了极高的准确性。在第一个变性循环之前,采用一种专用的抗体使聚合酶失活,从而最大限度地减少了在反应设置和启动期间因非特异性引发事件产生的伪扩增产物,并提高总反应效率。 KAPA HiFi Uracil+ 热启动高保真酶预混液(2X)是一种可以直接使用的混合物,含有PCR所需的所有组分,但不包括引物和模板。ReadyMix含所有dNTP(dATP、dCTP、dGTP、dTTP),各0.2 mM,不含dUTP。
产品应用
亚硫酸氢盐转化的DNA的扩增 亚硫酸氢钠处理将未甲基化的胞嘧啶转化为尿嘧啶,而甲基化的胞嘧啶不会被转化。在随后的PCR扩增过程中,胸腺嘧啶替换尿嘧啶,使得可以通过测序将DNA甲基化精确到碱基对水平。KAPA HiFi Uracil+ 热启动高保真酶预混液能够提供高产量的亚硫酸氢盐转化的DNA,并可进行稳定扩增。 KAPA HiFi Uracil+ 热启动高保真酶预混液特别适用于NGS应用,对于亚硫酸氢盐转化的文库,能够减少扩增误差,且提高扩增效率。使用KAPA HiFi Uracil+ 热启动高保真酶预混液进行文库扩增,可显着改善覆盖深度均一性,并更加完整地覆盖参考序列。 扩增受损的DNA样本 胞嘧啶脱氨作用会在一段较长的时间内自行发生,温度升高时脱氨速度加快,并导致DNA和游离核苷酸中尿嘧啶的累积。当其他校正酶无效时,KAPA HiFi Uracil+ DNA聚合酶可以从含有尿嘧啶的受损DNA模板中进行高保真扩增。 采用UDG预防扩增子污染 KAPA HiFi Uracil+ DNA聚合酶在扩增过程中很容易掺入dUTP,因此可与尿嘧啶-DNA-糖基化酶(UDG)联合使用,以防止残留污染。需要在PCR中加入dUTP,以便在扩增前通过UDG的消化去除可能污染后续反应的扩增子。 第1节:亚硫酸氢盐转化的NGS文库扩增的实验方法
第2节:标准PCR的实验方法 重要!KAPA HiFi Uracil+热启动高保真酶预混液包含一份经过生物加工的B族(校正)DNA聚合酶和独特配方的缓冲液,需要专门的反应条件。如果不遵守这些条件,则可能出现反应失败。有关更多信息,请参阅重要参数。
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