适用说明:本文档适用于货号为 KK2600(07958919001), KK2601(07958927001)及 KK2602 (07958935001)产品。
友情提示:本文档包含原说明书中的产品描述,产品应用及实验操作流程、故障排查等主要信息,欲了解关于本产品详细说明及信息,建议参考原说明书 (点击面板上“下载PDF”可下载)。
产品描述
KAPA HiFi热启动高保真DNA聚合酶是一种新型B族DNA聚合酶,经过生物加工增加了对DNA的亲和力,无需借助辅助蛋白或DNA结合域。与野生型B族DNA聚合酶相比,这种酶固有的高延伸能力,能显著提高产量、催化速度和灵敏度。此外,还能显著改善扩增长片段以及富含GC和AG片段的能力。这种酶与专用抗体结合,能够抑制酶活直至第一次变性步骤。从而可防止在反应体系配制期间发生非特异性扩增,还能提高灵敏度,并改善反应效率。 在高保真酶预混液PCR试剂盒中,KAPA HiFi热启动高保真DNA聚合酶以方便的2X预混液形式提供,其中包含了除引物和模板之外的所有反应组分。每份1X浓度的ReadyMix反应体系中含有0.3 mM dNTPs、2.5 mM MgCl2、0.5U KAPA HiFi热启动高保真DNA聚合酶(每25 μL反应含0.5 U)和稳定剂。 KAPA HiFi 热启动高保真酶预混液专为不同类型片段大小的靶标的常规高保真PCR 而设计。其错误率比野生型Taq DNA聚合酶低约100倍,但成功率和产量高于野生型B族(校正)DNA聚合酶。此外,KAPA HiFi HotStart明显比野生型B族DNA聚合酶需要的反应时间更短。 KAPA HiFi热启动高保真DNA聚合酶具有5'→3'聚合酶和3'→5'外切核酸(校正)的活性,但没有5'→3'外切核酸酶活性。强大的3'→5'外切核酸酶活性在DNA扩增过程中提供了极高的准确性,使得KAPA HiFi热启动高保真DNA聚合酶在所有B族DNA聚合酶中发表的错误率最低(每加入3.6 x 106个核苷酸发生1个错误)。这种保真度比野生型Taq DNA聚合酶高约100倍,也比其他B族DNA聚合酶和聚合酶混合物的保真度更高,可高达10倍。 使用KAPA HiFi热启动高保真酶预混液生成的DNA片段可用于常规下游分析和应用,包括限制酶消化、克隆和测序。使用KAPA HiFi热启动高保真酶预混液生成的PCR产物是平末端的,但可以加3'-dA尾,用于TA克隆。
产品应用
KAPA HiFi HotStart PCR试剂盒适用于:
● 常规测序的PCR(直接测序或克隆PCR产物的测序) ● 新一代测序文库扩增(与KAPA文库扩增实验方法结合使用时) ● 扩增DNA片段用于克隆和蛋白质表达或基因组表征 ● 定点突变
有关这些应用和其他高保真PCR应用的更多信息,请参阅www.sequencing.roche.com上有关定点突变、常规高保真度PCR和高GC区域的高保真度PCR的KAPA HiFi应用说明。
实验操作流程
重要!KAPA HiFi热启动高保真酶预混液包含一份经过生物加工的B族(校正)DNA聚合酶和独特配方的缓冲液,需要专门的反应条件。如果不遵守这些条件,则可能出现反应失败。有关更多信息,请参阅重要参数。
故障排除
使用过本产品的部分文献
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