摘要:为了提高分离效率,采用两步法进行肌肉干细胞的分离和分选。首先分离小鼠骨骼肌,并将肌肉组织消化为单细胞悬液。然后利用流式分选的方法,使用杂细胞标签CD45、CD31和Sca I进行负筛后,再使用VCAM1进行阳性筛选,从而获得高纯度肌肉干细胞。采用此方法获得的肌肉干细胞可直接用于各种测序或进行细胞培养。
关键词: 骨骼肌, 肌肉干细胞, VCAM1
材料与试剂
仪器设备
实验步骤
一、 肌肉解剖 (15~20 min/只小鼠,6周龄~28月龄均可)
注意事项
溶液配方
致谢
感谢香港科技大学Tom H Cheung博士共同讨论肌肉干细胞分选方法。感谢中国科学院生物化学与细胞生物学研究所细胞平台的边玮、王雪冬、丁宇波、俞珺璟老师在分选仪器使用中的帮助。感谢中国科学院器官重建与制造战略性先导科技专项 (XDA16021400),科技部重点研发计划 (2017YFA002700),自然科学基金委员会(91649104,31671536),NN-CAS Foundation,上海市科委 (Y753S11802,18ZR1446300) 的资助。
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