摘要:B 细胞主要通过呈递抗原和产生抗体在自身免疫病的发生、发展中发挥重要作用,每个B细胞开始时一般均表达IgM,但随后可通过抗体类别转换表达和产生IgG, IgA或IgE,B细胞针对每个抗原产生的抗体类别不同,且不同类别的抗体功能也不同,于是我们利用检测抗原特异性B细胞免疫反应后的抗体类别,对其表达和功能进行分析。由于流式细胞仪是使细胞以单个方式依次通过探测光束,并采集细胞被光照时产生的各种信号,并能对多个荧光参数进行关联分析的一种仪器,所以我们对富集后的抗原特异性B细胞抗体类别通过流式细胞仪进行检测。
关键词: B细胞, 流式细胞染色, 流式细胞仪
材料与试剂
仪器设备
实验步骤
一、 收集细胞
表3. 流式染色配置方案
结果与分析
实验结果见图1。 图1. 野生型小鼠Qb免疫11天后通过富集Qb-AF647+细胞,从中gate出发生了类别转换的记忆细胞,检测各Ig亚型的比例 (Liao等,2017)
失败经验
溶液配方
致谢
侯百东实验室的工作得到中国科学院,国家自然科学基金和国家科技重大专项的支持。本文实验方案改编自本实验室的发表文章Liao等 (2017) 和Hua和Hou (2013)。
参考文献
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