摘要:造血祖细胞 (Hematopoietic Progenitor Cells, HPCs)是由造血干细胞分化来的,具有定向分化潜能的造血前体细胞。造血祖细胞主要分为4类:common myeloid progenitors (CMPs),common lymphoid progenitors (CLPs),granulocyte-macrophage progenitors (GMPs) 和megakaryocyte-erythrocyte progenitors (MEPs)。分析造血祖细胞可研究造血干细胞向各系分化的能力。本文以小鼠骨髓组织为例,使用7色共14种抗体,对4类主要的造血祖细胞 (CMPs、CLPs、GMPs和MEPs) 进行标记。
关键词: 小鼠, 造血祖细胞, 流式细胞术
材料与试剂
仪器设备
实验步骤
结果与分析
研究表明造血发育谱系为,长期造血干细胞 (Long-term HSCs,LT-HSCs) 分化为短期造血干细胞 (short-term HSCs,ST-HSCs),ST-HSCs分化为多能祖细胞 (Multipotent progenitor,MPP),MPP分化为具有定向分化能力的前体细胞如:CLPs和CMPs等。CLPs继续分化为多种种类的淋巴细胞,CMPs分化为粒系/巨噬细胞前体细胞GMPs和红系/巨核系前体细胞MEP。IL-7R标记CLPs和其他下游淋系祖细胞,CD135主要表达在较早期祖细胞和ST-HSC上,故IL-7R和CD135联用可标记CLPs。通过集落形成能力及移植实验发现,分选的各种造血祖细胞具有体内、外定向分化潜能,如:CD16/32loCD34+标记的CMPs可分化为CFU-megakaryocyte (CFU-Meg), CFU-megakaryocyte/erythroid (CFU-MegE),CFU-granulocyte/macrophage (CFU-GM),CFU-granulocyte (CFU-G) 和 CFU-macrophage (CFU-M) 等多种髓系集落;CD16/32hiCD34+标记的GMPs只可分化为CFU-M,CFU-G和CFU-GM巨噬细胞或粒系细胞集落,CD16/32loCD34-标记的MEPs只能分化为CFU-Meg,BFU-E 和 CFU-MegE巨核细胞和红系细胞的集落。而移植CD16/32loCD34+标记的CMPs可诱导受体小鼠骨髓和脾脏出现供体来源的Gr-1+/Mac-1+ 的粒单核细胞和TER119+的红系细胞;移植CD16/32hiCD34+标记的GMPs只可诱导骨髓和脾脏出现供体来源的Gr-1+/Mac-1+的粒单核细胞;移植CD16/32loCD34-标记的MEPs只可诱导骨髓和脾脏出现供体来源的TER119+的红系细胞。但移植4周后以上供体来源的细胞就会消失,提示以上造血祖细胞只有有限的自我更新能力 (Kondo等,1997; Akashi等,2000)。 图1为小鼠骨髓造血祖细胞抗体及其同型抗体画门示意图。图2为小鼠造血组细胞分析流式图示例。首先以FSC-A 和SSC-A为轴,画出主要细胞群,然后以FSC-A 和FSC-H去除黏连细胞,画出单个细胞群,再画出Lineage-细胞群,一般占单个细胞群的10%,然后画出Sca-1-c-kit+细胞群 (LK,lineage-Sca-1-c-kit+),在LK中以CD34和CD16/32为轴,根据两者的表达情况画分为GMPs、CMPs和MEPs。另外,从Lineage–细胞群出发,以IL-7R和CD135为轴,可画出IL-7R+CD135+的CLPs。 图1. 小鼠造血祖细胞抗体及其同型抗体画门示意图 图2. 小鼠造血祖细胞分析流式图
失败经验
细胞分群不明显:
溶液配方
参考文献
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