摘要:造血干细胞 (Hematopoietic Stem Cells, HSCs) 是具有长期自我更新,以及分化为各类成熟血细胞能力的成体干细胞。本文以小鼠骨髓组织为例,使用7色共14种抗体,标记出在骨髓细胞中的造血干细胞。用此法标记的HSCs还可进行细胞周期、凋亡等实验,并可用于分选实验。
关键词: 小鼠, 造血干细胞, 流式细胞术
材料与试剂
仪器设备
实验步骤
结果与分析
造血干细胞是具有长期自我更新,以及分化为各类成熟血细胞能力的成体干细胞。目前较常用的小鼠造血干细胞标志为Lin-Sca1+cKit+CD150+CD48- (CD150HSC) 和Lin-Sca1+cKit+CD34-CD135- (Longterm HSC,LT-HSC) (Kiel等,2005; Yang等,2005)。 Lineage系列抗原 (Lin)主要表达在骨髓成熟细胞上,通过Lin阴性标记可以去除大部分成熟细胞。Sca-1表达于小鼠骨髓HSC和髓系细胞,c-kit主要表达在造血干祖细胞上,所以HSC存在于Lin-Sca1+cKit+细胞群中。此外,淋巴细胞活化信号分子 (signaling lymphocyte activation molecule,SLAM) 家族受体是常用的HSC标记,其中CD150特异表达于拥有长期造血重建能力的HSC中 (LongTerm-HSC,LT-HSC),CD48阳性的细胞无长期造血能力,所以使用Lin-Sca1+cKit+CD150+CD48-即可特异标记出CD150HSC (Kiel等,2005)。另外,CD34不表达或弱表达于小鼠HSC中,CD135主要表达于拥有短期造血重建能力的ShortTerm HSC (ST-HSC)中,故使用Lin-Sca1+cKit+CD34-CD135- (LongTerm HSC) 可用于标记小鼠骨髓中的LT-HSC (Osawa等,1996; Christensen 和 Weissman,2001; Yang等,2005)。 图1 为小鼠骨髓造血干细胞各抗体及其同型抗体画门流式示意图。图2为小鼠造血干细胞分析流式图示例。首先以FSC-A 和SSC-A为轴,画出主要细胞群,然后以FSC-A和FSC-H去除黏连细胞,画出单个细胞群,再画出Lin-细胞群,一般占单个细胞群的10%,然后画出Sca1+cKit+细胞群 (LSK, Lin-Sca1+cKit+),接下来可根据实验需要画出CD150+CD48- (CD150HSC) 或CD34-CD135- (LT-HSC)、CD34+CD135- (ST-HSC) 和CD34+CD135+ (Multipotent Progenitor,MPP)。 图1. 小鼠骨髓造血干细胞各抗体及其同型抗体画门流式示意图 图2. 小鼠造血干细胞分析流式图
失败经验
细胞分群不明显:
溶液配方
参考文献
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