摘要:小鼠肝脏器官在受到胆汁淤积性肝损伤过程中,部分肝细胞会去分化为类肝前体细胞,开始表达肝前体细胞相关的蛋白SOX9。经典的肝脏灌流实验可获得纯度超高的小鼠原代肝细胞悬液。为获得类肝前体细胞,我们利用的是转基因小鼠Sox9-EGFP。由于该小鼠的Sox9基因的启动子后插入EGFP,因此EGFP表达即可指示SOX9蛋白的表达。通过流式分选GFP阳性的原代肝细胞,即可获得类肝前体细胞。
关键词: 小鼠, 类肝前体细胞, 流式分选
材料与试剂
仪器设备
实验步骤
结果与分析
小鼠肝脏在受到DDC慢性损伤7天后,SOX9阳性的类肝前体细胞会大量出现 (Yanger等, 2013),这些细胞同时表达eGFP,通过肝脏灌流及流式分选可以获得纯度较高的SOX9阳性的类肝前体细胞 (Li等, 2016;Hu等, 2018)。 图2为对DDC饲料喂养的野生型小鼠进行肝脏灌流后流式分析的结果,结果表明几乎没有GFP阳性的肝细胞。图3为对DDC饲料喂养的Sox9-EGFP小鼠进行肝脏灌流后流式分析的结果,结果表明存在少量GFP阳性的肝细胞,即类肝前体细胞 (Li 等, 2019)。 图2. 流式细胞仪分析DDC饲料喂养的野生型小鼠肝脏中GFP阳性肝细胞的比例 图3. 流式细胞仪分析DDC饲料喂养的Sox9-EGFP小鼠肝脏中GFP阳性类肝前体细胞的比例
失败经验
溶液配方
致谢
该项研究得到了国家自然科学基金委、科技部和上海市科委的资助。该研究数据收集工作得到生化与细胞所公共技术服务中心分子平台、细胞平台、动物平台的支持。
参考文献
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