摘要:荧光原位杂交用于RNA和DNA在组织和细胞中的定位,而免疫组织化学用于蛋白质的定位。传统的荧光原位杂交技术非常复杂,耗时,而且效果不稳定。本文结合作者十几年的果蝇研究经验,介绍一个快速高效的荧光原位杂交技术。该方法通过设计短的目标序列而定制合成的DNA作为模板,体外转录制备荧光标记的RNA探针。针对DNA和RNA目标采用不同的温度杂交,然后将样品放在杂交混合液直接制片在激光扫描共聚焦显微镜下直接观察。此外,结合免疫组织化学和荧光原位杂交可以同时观察蛋白质和核酸在组织及细胞中的分布和定位。
关键词: 果蝇, 原位杂交, 荧光原位杂交, 核酸与蛋白质定位分析
材料与试剂
仪器设备
实验步骤
一、DNA模板的序列设计 本技术先从DNA寡聚体中通过体外转录制备短的荧光标记的RNA探针。下面是DNA寡聚体模板的序列设计方法。
二、体外转录制备荧光标记的RNA探针
三、果蝇组织即速荧光原位杂交
四、果蝇组织蛋白质和RNA/DNA定位
五、制片和成像
溶液配方
致谢
早期方法为作者在美国卡内基研究所Joseph Gall实验室做博士后期间优化。刘冀珑实验室的工作得到上海科技大学,英国牛津大学以及英国医学理事会的支持。本文实验方案改编自Liu等 (2006),Liu和Gall (2007) 以及Nizami等 (2015).
参考文献
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