摘要:细胞周期指细胞从第一次分裂结束产生新细胞到第二次分裂结束所经历的全过程,细胞周期进程中存在多个检验点。在G1期和S期之间存在DNA合成起始转换点,简称S期检验点;在G2期和M期之间存在有丝分裂诱导转换点,简称G2/M检验点。检测S期检验点通常采用BrdU或EdU方法。BrdU (5-Bromo-2ʹ-Deoxyuridine) 全称5-溴-2'-脱氧尿嘧啶核苷,EdU(5-Ethynyl-2ʹ-Deoxyuridine) 全称5-乙炔基-2'-脱氧尿嘧啶核苷,它们均为胸腺嘧啶类似物,能够在S期替代胸腺嘧啶 (T) 掺入正在复制的DNA中。BrdU可以使用抗BrdU单克隆抗体检测,EdU通过与分子染料的共轭结合,高效、快速检测细胞中的DNA复制。在有丝分裂期组蛋白3-H3Ser10被磷酸化修饰,这是细胞有丝分裂进程中的特征性事件。检测G2/M检验点通常使用抗磷酸化组蛋白3-H3Ser10抗体 (p-H3) 免疫染色方法,通过对阳性细胞进行计数,分析细胞是否进行了正常的有丝分裂。本文将依次对上述方法进行介绍。
关键词: S期检验点, G2/M检验点, BrdU, EdU, p-H3
方法1:EdU法检测果蝇幼虫眼成虫盘S期检验点
摘要:使用EdU法检测果蝇幼虫眼成虫盘中的S期检验点 (Daul等,2010;Song等,2018)。
材料与试剂
仪器设备
实验步骤
方法2:BrdU法检测果蝇幼虫脑组织S期检验点
摘要:使用BrdU法检测果蝇大脑组织中的S期检验点 (Jaklevic和Su,2004;Song等,2018)。
方法3:p-H3抗体检测果蝇幼虫翅膀成虫盘G2/M检验点
摘要:使用抗磷酸化组蛋白3-H3Ser10抗体 (p-H3) 免疫染色方法检测G2/M检验点 (Liu等,2012;Yuan等,2018)。
溶液配方
致谢
感谢实验室所有过去和现在成员的工作,完善了本文方法。这项工作得到了国家重大基础研究项目–“973”项目 (2010CB934004),国家自然科学基金项目 (31771437,31501165,31271480,30871388),中国科学院“百人计划”,辽宁省“攀登学者”的支持。 以上实验方法已在下列论文中使用:Liu等 (2012);Song等 (2018);Yuan等 (2018)。 作者贡献声明:本文中方法1,2由王清华撰写,徐起,王清华修改;方法3由徐起撰写,王清华,徐起修改;秘晓林审校。
参考文献
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