果蝇总RNA制备   

How to cite Favorites Q&A Share your feedback Cited by

 

摘要:主要介绍制备果蝇总RNA的方法,为后面的RNA实验做准备。

关键词: 果蝇, 总RNA, 制备

材料与试剂

  1. 1.5 ml离心管
  2. 果蝇
  3. TRIzolTM Reagent (InvitrogenTM, catalog number: 15596026)
  4. TURBO DNA-freeTM Kit (InvitrogenTM, catalog number: AM1907)
  5. 异丙醇
  6. 乙醇
  7. DEPC-H2O

仪器设备

  1. 离心机 (Eppendorf)
  2. Thermomixer compact (Eppendorf)

实验步骤

注:该实验需要在RNA洁净区操作,RNA易降解,需要使用RNA专用试剂耗材和设备。务必佩戴洁净的手套甚至口罩。

  1. 取200 μl TRIzol置于1.5 ml离心管中,放在冰上,将麻醉的10只果蝇放入冰上的离心管中,将果蝇碾碎,再加入800 μl TRIzol试剂,颠倒混匀。
  2. 室温放置10 min,间歇混匀数次。
  3. 4 °C,12,000 × g离心10 min,去掉果蝇残体,取上清至新管。
  4. 加入200 μl氯仿,混匀,室温放置5 min。
  5. 4 °C,12,000 × g离心15 min。
  6. 取上清 (约500 μl) 到新的RNAase free的离心管中,加入等体积的异丙醇混匀,室温放置10 min。
  7. 4 °C,12,000 × g离心30 min。
  8. 弃上清,加入500 μl 70%乙醇,颠倒数次,使RNA漂浮。
  9. 4 °C,7,500 × g离心5 min。
  10. 弃乙醇,如果残留的乙醇有挂壁现象,倒掉液体后再短暂离心,将残液用移液器吸出。室温放置直到白色沉淀呈透明装时加入50 μl DEPC-H2O溶解。
  11. 50 °C,600 rpm金属浴震荡混匀10 min或者时不时轻弹混匀。
  12. 加入1 μl DNase,5 μl DNase Buffer,37 °C温育30 min。
  13. 加5 μl DNAase inactive reagent,室温放置5 min,间歇混匀2~3次。
  14. 4 °C,10,000 × g离心1.5 min。
  15. 转移上清至新的EP管中,测浓度;-80 °C保存。

Copyright: © 2019 The Authors; exclusive licensee Bio-protocol LLC.
引用格式:邓娟, 刘南. (2019). 果蝇总RNA制备. Bio-101: e1010254. DOI: 10.21769/BioProtoc.1010254.
How to cite: Deng, J and Liu, N. (2019). Preparation of Drosophila Total RNA. Bio-101: e1010254. DOI: 10.21769/BioProtoc.1010254.
Q&A

Please login to post your questions/comments. Your questions will be directed to the authors of the protocol. The authors will be requested to answer your questions at their earliest convenience. Once your questions are answered, you will be informed using the email address that you register with bio-protocol.
You are highly recommended to post your data including images for the troubleshooting.

You are highly recommended to post your data (images or even videos) for the troubleshooting. For uploading videos, you may need a Google account because Bio-protocol uses YouTube to host videos.