Search

小鼠剖腹产   

蔡哲平 蔡哲平 *王国宏 王国宏 *陈扬 陈扬 何苗何苗  (*contributed equally to this work)
How to cite Favorites Q&A Share your feedback Cited by

摘要:小鼠是生命科学研究中常用的重要模式生物,有着品系稳定和易于繁殖等优点。出于净化繁殖、胚胎移植等实验需要,或由于胚胎期进行的某些实验操作 (如胚胎给药、子宫内电转等) 及其它遗传或环境因素,导致小鼠不能正常分娩时,常通过剖腹产取代自然分娩。剖腹产获得的仔鼠需由代乳母鼠抚养以保证存活。

关键词: 小鼠, 剖腹产, 代乳母鼠

材料与试剂

  1. 医用湿巾 (含75%酒精)
  2. 纸巾
  3. 无菌垫
  4. 适龄孕鼠
  5. 代乳母鼠

仪器设备

  1. 组织剪
  2. 解剖剪
  3. 解剖镊
  4. 加热垫

实验步骤

  1. 准备适龄孕鼠和代乳母鼠:小鼠剖腹产一般进行于胚胎期第19天,即查到阴栓后的第18天下午 (查到栓当天清晨计为0.5天)。代乳母鼠应已产仔不超过5天,以0-2天为最佳。
  2. 准备好手术需要的所有器械和物品。所有器械使用前应高温消毒,或用75%酒精擦拭消毒。
  3. 通过颈椎脱臼法快速处死孕鼠。不能使用药物过量麻醉法或窒息法处死,否则会影响仔鼠存活。
  4. 腹部做切口取出子宫:用75%酒精消毒小鼠腹部,使用解剖剪沿中线快速剪开皮肤和肌肉。可观察到成串的胚胎位于腹腔两侧。用钝头的器械或用手指将子宫取出放置于无菌垫上。
  5. 取出胚胎:小心地剪开子宫壁,暴露胎膜包裹下的胚胎。剥离卵黄囊和羊膜,剪断脐带。
  6. 擦拭胚胎表面的羊水并刺激其呼吸:用指腹在干净的纸巾上轻柔滚动胚胎,以促进呼吸和清除胚胎表面和口鼻处的羊水和分泌物。
  7. 将仔鼠转移至37 °C加热垫上装有潮湿的纸巾的容器中保持体温。能够正常自主呼吸的仔鼠由于血液含氧量的增加,将由暗红变成粉红,活动活跃,并在轻夹尾巴时发出叫声。
  8. 将能够正常呼吸的胎鼠转移至代乳笼中:适当拿出代乳鼠的原生仔鼠,使代乳后的最终仔鼠数量与代乳鼠原本仔鼠的数量相近,并将仔鼠与代乳笼中的垫料和原生仔鼠混合以沾染代乳鼠气味。要注意尽量缩小剖腹产仔鼠与原生仔鼠的体温差异。注意观察代乳母鼠是否将剖腹产仔鼠和原生仔鼠叼回哺乳。若代乳母鼠对剖腹产仔鼠有攻击行为,需及时更换。
以上操作步骤见视频1。

视频 1. 小鼠剖腹产

结果与分析

  1. 小鼠剖腹产可以很大程度上提高难以顺产的仔鼠存活率,提高实验效率。
  2. 小鼠剖腹产需要操作者尽快完成实验,否则仔鼠有窒息的危险,同时也要注意操作轻柔不要伤到仔鼠,因此应该尽量快速熟练完成实验,并确保较高的剖腹产成功率。

注意事项

  1. 为了提高仔鼠的存活率,从取出仔鼠到开始正常肺呼吸的过程,不宜超过2分钟,剖腹产全过程不宜超过10分钟。
  2. 问题解析

致谢

感谢何苗老师组提供实验室、实验器材与孕鼠及何苗老师和陈扬师姐演示实验。本文改编自匡宇等 (1996),师长宏等 (2011),隋世燕等 (2010),Behringer等 (2013),Murphy等 (1993) 和参考文献6。

伦理学声明

本演示实验对小鼠进行的所有研究行为均遵循和符合国家《实验动物管理条例》和有关动物保护与使用的法律和法规,并获得复旦大学实验动物中心动物伦理委员会批准。请善待实验动物。

参考文献

  1. 匡宇,王荫槐,张纪叔. (1996). 实验鼠的剖腹产代乳净化. 实验动物科学与管理 1996(4): 18-20.
  2. 师长宏,冯秀亮,张海. (2011). 小鼠剖腹产技术. 基础动物实验技术与方法 
  3. 隋世燕,王林刚,赖仲辉,夏俊辉. (2010). 小鼠剖腹产净化方法研究. 大理学院学报 09(10): 46-49.
  4. Behringer, R., Gertsenstein, M., Nagy, K. and Nagy, A. (2013). Manipulating the mouse embryo: a laboratory manual. 4th edition. Cold Spring Harbor Laboratory Press.
  5. Murphy, D. and Carter, D. A. (1993). Caesarean section and fostering. In: Transgenesis Techniques. Humana Press, 18(2): 177-178.
  6. Needham, J., Smith, A. and Prestrud, K. W. Caesarian rederivation in the mouse
Copyright: © 2018 The Authors; exclusive licensee Bio-protocol LLC.
引用格式:蔡哲平 , 王国宏 , 陈扬 , 何苗. (2018). 小鼠剖腹产. Bio-101: e1010243. DOI: 10.21769/BioProtoc.1010243.
How to cite: Cai, Z. P., Wang, G. H., Chen,Y. and He, M. (2018). (2018). Caesarean Section in Mouse. Bio-101: e1010243. DOI: 10.21769/BioProtoc.1010243.
Q&A

Please login to post your questions/comments. Your questions will be directed to the authors of the protocol. The authors will be requested to answer your questions at their earliest convenience. Once your questions are answered, you will be informed using the email address that you register with bio-protocol.
You are highly recommended to post your data including images for the troubleshooting.

You are highly recommended to post your data (images or even videos) for the troubleshooting. For uploading videos, you may need a Google account because Bio-protocol uses YouTube to host videos.