实验原理:细胞融合即细胞核来源于一个亲本,线粒体基因组或叶绿体基因组来源于另一个亲本的融合方式。在柑橘中,我们采用电融合。在交流电作用下,双亲原生质体迅速平行排成多个串珠,随后在直流电作用下,部分小串珠开始解体又融合在一起,形成新的圆球体。细胞融合能有效克服有性杂交不亲和以及远缘杂交障碍等困难,突破生殖隔离。
关键词: 基因组, 电融合, 原生质体
材料与试剂
仪器设备
实验步骤
结果与分析
融合细胞圆球化后,采用BH3液体浅层培养融合细胞。培养15 d后,培养皿中出现了肉眼可见的白色的小颗粒,此时降低渗透压至0.45 M。培养25 d后,培养皿中出现较大细胞团,此时降低渗透压至0.3 M。培养至35 d后时,培养皿中出现致密的淡黄色小颗粒,将其转移至胚状体诱导培养基中,固液共培,弱光下继续培养,待胚状体长出转移至胚状体增殖培养基,胚状体迅速壮大、转绿。随后将长势良好的胚状体转移至生芽培养基继续培养,当再生芽长至有3-4片叶时,将其从胚状体上切下并转至生根培养基诱导生根。再生完整根系后,挑选根系健壮、生长势好的再生苗炼苗2周,最后移栽到温室。
注意事项
溶液配方
一、培养基相关母液
二、培养基的配制
参考文献
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