实验原理:在特定的解离液中切碎材料后使细胞破碎,分散细胞器,进而解离出细胞核,同时解离液还可防止细胞核间相互粘连。PI染细胞核后,在一定压力下逐个通过喷嘴,进入流式照射室,细胞核所带的荧光素被激发,发射出荧光,根据荧光的发射波长,选择相应的荧光通道进行检测。
最后,光信号再转化成电信号,经数据处理输入电脑,呈现出点图和峰图两种流式图谱,峰图纵坐标为粒子数,横坐标为荧光强度。由于细胞核G1期的DNA含量反映这个细胞的倍性,因此,运用流式细胞仪测定的植物核DNA含量可以间接获取细胞的倍性。生物体的单倍体基因组所含DNA总量称为C值。
实验目的:通过流式细胞仪检测特定组织中细胞核的倍性。
材料与试剂
- 枪头
- 刀片 (蓝吉列)
- 400目滤膜 (国产)
- 锡箔纸
- 2 ml离心管
- 柠檬酸
- Tween 20
- Na2HPO4·12H2O
- Tris
- Na2EDTA
- 四盐酸精胺
- KCl
- NaCl
- Triton X-100
- β-巯基乙醇
- RNase
- 细胞核分离缓冲液 (见溶液配方)
- PI染液 (见溶液配方)
- DAPI染液 (见溶液配方)
注:本实验所用试剂均为进口试剂。
仪器设备
- 移液枪
- 离心机
- 流式细胞仪 (Backman)
实验步骤
Copyright: © 2018 The Authors; exclusive licensee Bio-protocol LLC.
分类
细胞生物学 > 单细胞分析 > 流式细胞术
植物科学 > 植物细胞生物学 > 单细胞分析
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