实验原理:通过SDS-PAGE将不同分子量大小的蛋白分开后,将蛋白转移到固相载体(例如PVDF膜)上,固相载体以非共价键形式吸附蛋白质,且能保持电泳分离的多肽类型及其生物学活性不变。以固相载体上的蛋白质或多肽作为抗原,与对应的抗体起免疫反应,再与酶或同位素标记的第二抗体起反应,经过底物显色或放射自显影以检测电泳分离的特异性目的基因表达的蛋白成分。 实验目的:作为一个基础性的实验,其主要目的是检测目的蛋白的特异性及丰度。
关键词: 蛋白质, Western, SDS-PAGE, 免疫反应
材料与试剂
仪器设备
实验步骤
注:使用Bio-Rad的Mini-PROTEAN® Tetra System进行以下操作。 一、SDS-PAGE
二、蛋白转膜
溶液配方
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