实验原理:实时荧光定量PCR技术(Real-time PCR)是在常规PCR技术基础上发展而来的一种核酸定量技术。其基本原理是在常规PCR反应体系中加入荧光基团,通过荧光信号的按比例增加来反应DNA量的增加,从而对PCR产物进行实时监测,最后通过标准曲线对未知模板进行定量分析和检测。相较于常规PCR而言,实时荧光定量PCR技术不仅实现了对DNA/RNA模板的定量分析,而且具有灵敏度和特异性高、能实现多重反应、自动化程度高、无污染、实时和准确等特点。 实验目的:目前实时荧光定量PCR技术正广泛应用于基因表达分析,等位基因分析,CHIP结果分析,转基因生物检测等领域,成为最为重要的核酸扩增和检测手段之一。本文仅以水稻表达谱分析为案例进行阐述。
关键词: 荧光实时定量PCR, Real-time PCR, 基因表达
材料与试剂
仪器设备
实验步骤
生成文件,以CT值进行相对表达量的计算。
注:计算公式及原理参考Livak等2001.
注意事项
参考文献
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