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利用荧光实时定量PCR技术进行表达谱分析

Analysis of Expression Profiles Using Real-time PCR

翁 翁小煜
都 都浩
欧 欧阳亦聃

发表时间: 2018年04月09日 DOI: 10.21769/BioProtoc.1010115 浏览次数: 11212

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实验原理：实时荧光定量PCR技术(Real-time PCR)是在常规PCR技术基础上发展而来的一种核酸定量技术。其基本原理是在常规PCR反应体系中加入荧光基团，通过荧光信号的按比例增加来反应DNA量的增加，从而对PCR产物进行实时监测，最后通过标准曲线对未知模板进行定量分析和检测。相较于常规PCR而言，实时荧光定量PCR技术不仅实现了对DNA/RNA模板的定量分析，而且具有灵敏度和特异性高、能实现多重反应、自动化程度高、无污染、实时和准确等特点。
实验目的：目前实时荧光定量PCR技术正广泛应用于基因表达分析，等位基因分析，CHIP结果分析，转基因生物检测等领域，成为最为重要的核酸扩增和检测手段之一。本文仅以水稻表达谱分析为案例进行阐述。

Keywords: 荧光实时定量PCR search Real-time PCR search 基因表达 search

材料与试剂

  1. 实时荧光定量PCR板及膜 (ABI)
  2. 0.6 ml及1.5 ml tubes (AXYGEN)
  3. 20 µl、200 µl及1 ml tips (AXYGEN)
  4. SYBR premix Ex Taq (TaKaRa)

仪器设备

  1. 2.5 µl、10 µl、20 µl、200 µl、1 ml移液器
  2. 实时荧光定量PCR仪 (ABI公司，7500实时荧光定量PCR仪)
    注：目前市面有多种实时荧光定量PCR的平台，如ABI公司的7500，罗氏公司的LightCycler 480，伯乐公司的ICycler等，本文以本实验室用到的ABI公司的7500实时荧光定量PCR仪为例进行阐述。
  3. 离心机
  4. 紫外分光光度计

实验步骤

Copyright: © 2018 The Authors; exclusive licensee Bio-protocol LLC.
引用格式：翁小煜, 都浩, 欧阳亦聃. (2018). 利用荧光实时定量PCR技术进行表达谱分析. Bio-101: e1010115. DOI: 10.21769/BioProtoc.1010115.
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How to cite: Weng, X. Y., Du, H. and Ouyang, Y. D. (2018). Analysis of Expression Profiles Using Real-time PCR. Bio-101: e1010115. DOI: 10.21769/BioProtoc.1010115.
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分类

分子生物学 > RNA > qRT-PCR

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