A Simple Device for Surface Sterilization of Plant Tissues

材料与试剂

1. 橡皮筋
   
2. 无菌滤纸
   
3. 标签纸
   
4. 无菌水
   
5. 75%乙醇
   
6. 2%次氯酸钠
   
7. 90%乙醇
   

仪器设备

1. 玻璃管：7个；上下端口均不封口；内径2.5 cm，外径3 cm，高16 cm
   
2. 外容器：内径13 cm，外径14 cm，高18 cm，容量1.85 L
   
3. 铜网：圆形；直径15 cm，目数为20 目
   
4. 橡皮塞 (规格：大口 × 小口 × 高度 (mm)：26 × 19 × 28)
   
5. 镊子
   
6. 剪刀
   
7. 超净工作台
   

实验步骤

一、表面消毒简易装置的组装

1. 七个玻璃管1的上端开口均通过橡皮塞5进行对应的密封 (如图1B)。
   
2. 所有玻璃管1排列成图1D所示，然后通过橡皮筋4捆扎成束，下端开口处通过一张铜网3 (如图1C) 进行统一捆扎封底 (如图1A)。
   
3. 将玻璃管束置入外容器2内 (如图1D)。
   

二、三种实际操作方式

1. 准备四个本实用新型装置的外容器2的操作过程 (如图2所示)：
   
   1.1

   将样品用无菌水清洗，分拣并修剪好，用镊子将样品放入玻璃管1内 (一套装置可放入一种或七种以下的植物样品)，在玻璃管1对应的橡皮塞5上贴上写有样品名称或编号的标签，以橡皮筋4将七根玻璃管1固定好。
   1.2

   在四个外容器2中分别加入75%乙醇，2%次氯酸钠，90%乙醇和无菌水 (加入的量以没过玻璃管1内的样品为准)。
   1.3

   手持玻璃管束 (七根玻璃管1)，将其浸入75%乙醇中，浸泡30~60 s，期间以手将玻璃管束提起放下2~3次，然后用无菌水冲洗2~3次。
   1.4

   将玻璃管束转移到装有2%次氯酸钠的外容器2中，浸泡6~10 min，期间以手将玻璃管束提起放下数次。
   
   
   图1. 表面消毒简易装置的组装
   
   
   图2. 实际使用时的一种示意图
   
   
   1.5

   将玻璃管束转移到装有90%乙醇的外容器2中，浸泡30~60 s，期间以手将玻璃管束提起放下2~3次。
   1.6

   将玻璃管束转移到装有无菌水的外容器2中，更换三次无菌水，取出玻璃管束后将玻璃管束放在无菌滤纸上控干多余水分。
2. 准备一套本实用新型装置的操作过程 (如图3所示)：
   
   2.1

   将样品用无菌水清洗，分拣并修剪好，用镊子将样品放入玻璃管1内 (一套装置可放入一种或七种以下的植物样品)，在玻璃管1对应的橡皮塞5上贴上写有样品名称或编号的标签，以橡皮筋4将七根玻璃管1固定好。
   2.2

   在外容器2中都加入75%乙醇 (加入的量以没过玻璃管1内的样品为准)，将玻璃管束浸入75%乙醇中，浸泡30~60 s，期间以手将玻璃管束提起放下2~3次，然后用无菌水冲洗2~3次。
   
   
   图3. 实际使用时的另外一种示意图
   
   
   2.3

   将外容器2中液体更换为2%次氯酸钠 (加入的量以没过玻璃管1内的样品为准)，令玻璃管束在外容器2中浸泡6~10 min，期间以手将玻璃管束提起放下数次。
   2.4

   将外容器2中液体更换为90%乙醇 (加入的量以没过玻璃管1内的样品为准)，令玻璃管束在外容器2中浸泡6~10 min，期间以手将玻璃管束提起放下数次。
   2.5

   将外容器2中液体更换为无菌水 (加入的量以没过玻璃管1内的样品为准)，更换三次无菌水，取出玻璃管束后将玻璃管束放在无菌滤纸上控干多余水分。
   
   
3. 准备四套本实用新型装置的操作过程 (如图4所示) (可根据实验的需要可以自行增加本实用新型装置的套数)：
   
   3.1

   将样品用无菌水清洗，分拣并修剪好，用镊子将样品放入玻璃管1内 (一套装置可放入一种或七种以下的植物样品)，在玻璃管1对应的橡皮塞5上贴上写有样品名称或编号的标签，以橡皮筋4将玻璃管1每七个一组固定成束。
   3.2

   在四个外容器2中都加入75%乙醇 (加入的量以没过玻璃管1内的样品为准)，将四组玻璃管束浸入75%乙醇中，浸泡30~60 s，期间以手将每组玻璃管束提起放下2~3次，然后用无菌水冲洗2~3次。
   3.3

   将四个外容器2中液体都换做2%次氯酸钠 (加入的量以没过玻璃管1内的样品为准)，令玻璃管束在外容器2中浸泡6~10 min，期间以手将各组玻璃管束提起放下数次。
   3.4

   将四个外容器2中液体都换做90%乙醇 (加入的量以没过玻璃管1内的样品为准)，将四组玻璃管束浸入90%乙醇中，浸泡30~60 s，期间以手将每组玻璃管束提起放下2~3次。
   3.5

   将四个外容器2中液体都换做无菌水 (加入的量以没过玻璃管1内的样品为准)，更换三次无菌水，取出玻璃管束后将玻璃管束放在无菌滤纸上控干多余水分。
   
   

结果与分析

传统方法 (如图 5所示) 与使用本装置进行表面消毒所用时间做了对比。结果如下表：可知该表面消毒的简易装置大大提升了处理不同种样品的效率 (表1)。


图4. 实际使用时的再一种示意图

表1. 传统方法与使用本装置进行表面消毒所用时间的对比表


注：
1.每种样品的量按本实用新型装置所能容纳的最大容量来计；
2.操作方式三按四套本实用新型装置的饱和容量计，即处理的样品量四倍于其他方式。


图5. 传统方法步骤示意图

致谢

感谢基本科研业务费项目"筛选新型植物耐盐真菌及制剂创新的关键技术问题研究" (编号: RISP2013005, 2013-2016) 对本研究的大力支持

参考文献

1. 袁志林，潘雪玉，秦媛. (2016). 植物组织表面消毒的简易装置. 浙江: CN205093317U.