RNA Extraction from Strawberry with Commercial Kit

材料与试剂

1. 枪头
2. RNase-free离心管 (1.5 ml，2 ml)
3. 草莓果实
4. E.Z.N.A^® plant RNA kit试剂盒 (Omega Bio-tek, catalog number: R6827)
   
   1. Buffer RCL
   2. RWC
   3. RNA wash buffer I
   4. DEPC water
   5. HindBind RNA Spin column
   6. gDNA filter column
   7. 2 ml collection tube
5. β-巯基乙醇
6. Plantaid (博迈德, catalog number: RA107)
7. 液氮
8. 乙醇
9. 10x Loading buffer (Takara, catalog number: 9157)
   

仪器设备

1. 研磨用具
2. 移液枪
3. 振荡仪器
4. 水浴锅
5. 离心机
6. 电泳仪
7. 微量紫外分光光度计
   

实验步骤

1. 液氮研磨果实样品并装入1.5 ml RNase-free离心管，每管样品量大约100 mg (具体根据果实发育不同时期含水量而异，如小绿果时期取样量小于 50 mg，成熟期果实取样量不少于300 mg)。
   注：本方法也可用于草莓叶片RNA的提取，每管样品量同小绿果，约50 mg。
2. 加入500 μl buffer RCL (见溶液配方) (buffer RCL在使用前应加入β-巯基乙醇：每 1 ml buffer RCL加20 μl β-巯基乙醇)，涡旋振荡混匀。
3. 再向离心管中加入博迈得公司的plantaid 100 μl，再次涡旋震荡混匀。
4. 55 °C水浴锅中裂解1-3 min后，可再次涡旋震荡。
5. 室温14,000 x g离心5 min。
6. 将上清转入gDNA filter column (装入2 ml collection tube)，14,000 x g离心2 min (上清过多时可分2次转入)。
7. 将滤过液转入新的2 ml RNase-free离心管中，加入等体积的buffer RCB，吸打混匀。
8. 将混合液转入HindBind RNA Spin column (装入2 ml collection tube)，10,000 x g离心1 min，弃掉滤过液，将column放回collection tube。
9. 加400 μl RWC，10,000 x g离心1 min，弃掉滤过液和collection tube。
10. 将column放入新的collection tube，加入500 μl RNA wash buffer I，10,000 x g离心1 min，弃掉滤过液。
11. 重复上一步操作。
12. 10,000 x g，2 min空离除去乙醇。
13. 将HindBind RNA Spin column放入干净的1.5 ml RNase-free离心管，悬空滴入30 μl DEPC water至HindBind RNASpin column中的膜上，室温静置2 min，10,000 x g离心2 min，即得RNA溶液。
14. RNA 质量的检测：取2-3 μl RNA溶液与loading buffer 混匀，用琼脂糖凝胶电泳检测RNA条带及是否有DNA污染。
15. RNA浓度测定：取2 μl RNA 溶液用微量紫外分光光度计测定浓度并评估其质量。