DNA Extraction from Strawberry with CTAB

材料与试剂

1. 枪头
2. 离心管
3. 草莓组织
4. β-巯基乙醇
5. 液氮
6. 氯仿
7. 异戊醇
8. 异丙醇
9. NaAc
10. 乙醇
11. Tris-HCl (pH 8.0) (Solarbio, catalog number: T1140)
12. Na₂-EDTA
13. CTAB
14. PVP
15. NaCl 
16. RNase (Takara, catalog number: 2311A)
17. RNase-TE溶液 (见溶液配方) 
18. CTAB缓冲液 (见溶液配方)
    

仪器设备

1. 研磨用具
2. 移液枪
3. 水浴锅或烘箱
4. 离心机
5. -20 °C冰箱
6. NanoDrop超微量核酸蛋白测定仪
7. 电泳仪
8. 高压灭菌锅
   

实验步骤

1. 在CTAB缓冲液中加入β-巯基乙醇 (终浓度为0.2%)，使用前65 °C预热。
2. 称取100 mg草莓果肉组织/50 mg叶片组织，液氮研磨成粉末，装入预冷的2 ml离心管中。
3. 加入500 μl预热的CTAB，混匀，65 °C温育1 h，期间每15 min颠倒混匀。
4. 冷却到室温，加入500 μl氯仿:异戊醇 (24:1) 抽提，10,000 x g离心10 min，抽取上清液。
5. 上清液加入等体积 (500 μl) 的氯仿:异戊醇 (24:1) 再次抽提，10,000 x g离心10 min，再次吸取上清液。
6. 加入2/3体积的-20 °C预冷的异丙醇，1/10体积的3 M NaAc (pH=5.4)，轻轻混匀，-20 °C沉淀1 h。
7. 10,000 x g离心10 min，弃上清。
8. 加入500 μl 70%乙醇洗涤沉淀，10,000 x g离心10 min，弃上清。
9. 重复步骤8。
10. 放置10 min，待残存乙醇挥发完全，加入50 μl含RNase (30 μl/ml) 的TE溶液，37 °C温育30 min。
11. 用NanoDrop超微量核酸蛋白测定仪测定DNA溶液在波长230 nm，260 nm和280 nm处的吸收值并获得DNA浓度。取2 μl DNA溶液进行琼脂糖凝胶电泳，查看DNA完整性，-20 °C保存。
    

溶液配方

1. RNase-TE溶液
   

   Tris-HCl (pH 8.0) 终浓度10 mM	500 μl
   Na2-EDTA 终浓度1 mM	100 μl

   加水至50 ml 高压灭菌，室温保存
2. CTAB缓冲液
   

   1 M Tris-HCl (pH 8.0)	10 ml
   0.5 M Na2-EDTA (pH 8.0)	4 ml
   CTAB	2 g
   PVP	2 g
   NaCl	8.19 g

   定容至100 ml，高压灭菌，室温避光保存，用前按体积比加入3%的β-巯基乙醇