材料和试剂

注意：所有的3D印刷物的印刷和在使用Formlabs，窗体2 3D格雷和清除树脂（版本04）测试p rinter用50 - μm的分辨率。所有设计文件均可在github.com/buzsakilab/3d_print_designs 上找到，具体链接在下面的材料列表中提供。

微驱材料
3D 打印的微驱动组件：身体、手臂和底座：github.com/buzsakilab/3d_print_designs/tree/master/Microdrives/Plastic_recoverable
00-90 螺母（3）（麦克马斯特，目录号：92736A112）
00-90 螺钉，½” (2)（麦克马斯特，目录号：92482A235）
公头针（DigiKey，目录号：SAM1067-40-ND）
00-90 tap（麦克马斯特，目录号：2504A14）
氰基丙烯酸酯（乐泰，目录号：45208）
橡皮泥
1.2 mm 钻头（McMaster，目录号：2958A29）

微型驱动器支架材料和组装工具
3D 打印驱动器支架：github.com/buzsakilab/3d_print_designs/tree/master/Microdrives/Plastic_recoverable（图 1B）
00-90 螺母（3）（麦克马斯特，目录号：92736A112）
00-90 螺钉，1/4 英寸（1）（麦克马斯特，目录号：93701A005）
公头针（DigiKey，目录号：SAM1067-40-ND）
氰基丙烯酸酯（乐泰，目录号：45208）
T2螺丝刀（麦克马斯特，目录号：52995A31）
1.2 mm 钻头（McMaster，目录号：2958A29）

Stereotax 附件材料和组装工具
3D 打印立体定位附件：github.com/buzsakilab/3d_print_designs/tree/master/Microdrives/Plastic_recoverable
00-90 螺母（1）（麦克马斯特，目录号：92736A112）
00-90 螺钉，1/4 英寸（3）（麦克马斯特，目录号：93701A005）
公头针（DigiKey，目录号：SAM1067-40-ND）
氰基丙烯酸酯（乐泰，目录号：45208）
T2螺丝刀（麦克马斯特，目录号：52995A31）
1.2 mm 钻头（McMaster，目录号：2958A29）

混合基材
3D 打印鼠标底座：github.com/buzsakilab/3d_print_designs/tree/master/Mouse_hat_base
3D 打印老鼠基地：github.com/buzsakilab/3d_print_designs/tree/master/Rat_hat_base
铜网（Dexmet，目录号：3CU6-050FA）
牙科丙烯酸（Pearson Dental，目录号：G05-1224 和 G05-1226）

手术材料
Kimwipes（Kimtech，目录号：34120）
明胶海绵（Fisher Scientific，目录号：NC1861013）
H 2 O 2 （天鹅，目录号：S12794v）
C&B Metabond Base 10 ml（Parkell，目录号：P16-0116）
C&B Gold Catalyst（Parkell，目录号：P16-0052）
C&B Metabond Clear Powder（Parkell，目录号：P16-0121）
Ç eramic混合盘为metabond（Parkell，目录号：S387）
中号easuring为metabond匙（Parkell）
用于metabond的刷子（亚马逊，目录号：B071F8WSW8）
Unifast Trad象牙粉（Pearson Dental，目录号：G05-1224）
Unifast Trad Liquid（Pearson Dental，目录号：G05-1226）
Unifast TM 1:2 Package A2（Pearson Dental，目录号：G05-0037）
头发祛瘀人霜（奈尔）
聚维酮碘（亚马逊，目录号：B07MWTH4MW）
眼膏（Puralube，目录号：0574-4025）
钢笔（AmazonBasics，目录号：FC008A-1-M）
异氟醚
布比卡因
阿托品
类固醇
丁丙氨酯
氰基丙烯酸酯（乐泰，目录号：45208）
蒸馏水
Ultrazyme酶清洁片（Ultrazyme，目录号：B000LM0ZYS）

设备

用于连接到微驱动器的硅探针和设备
硅探针（Neuronexus、Cambridge Neurotech、Diagnostic Biochips）
3D 打印、组装的微驱动器
3D 打印、组装的驱动器支架和立体定位附件
鳄鱼夹的助手（Ridgerock Tools Inc.，目录号：01902）
注意：C用电工胶带覆盖鳄鱼夹。
刀片（SPI Supplies，目录号：05025-MB）

外科手术
立体定位仪（Kopf，目录号：962 型）
加热垫（Physitemp，目录号：TCAT-2LV）
手术刀手柄（Fine Science Tools，目录号：10003-12）
手术刀刀片（Fine Science Tools，目录号：10015-00）
精细剪刀（Fine Science Tools，目录号：14090-09）
Dumont 细钳（Fine Science Tools，目录号：11254-20）
刮刀工具（Fine Science Tools）
微型刮匙（精细科学工具，目录号：10080-05）
Dieffenbach Vessel Clips Straight（Harvard Apparatus，目录号：ST2 72-8815）
Diethrich Mini Bulldog Clamp（Harvard Apparatus，目录号：ST2 72-8817）
棉签（Fisher Scientific，目录号：19-062-616）
螺丝刀（亚马逊，目录号：B0058ECJIE）
000-120 螺钉 1/16"（Antrin Miniature Specialties，目录号：AMS120/1B-25）
牙钻（NSK，目录号：Ultimate XL）
0.7 mm 微型钻头的毛刺（Fine Science Tools，目录号：19008-07）
烙铁（Stannol，目录号：574104）
焊台（Weller，目录号：WD1）
助焊剂（Worthington，目录号：331928）
焊膏（快速芯片，目录号：23271700）
理发器（Wahl，目录号：9990-1201）
牙科 LED 灯（Aphrodite，目录号：AP-016B）
接地/参考线（Phoenix Wire Inc.，目录号：36744MHW - PTFE）

程序

微驱组件（图2A- 2 M）
在00-90黄铜六角螺母的外表面涂少许氰基丙烯酸酯胶（乐泰凝胶），然后将其插入手臂。
将机械臂推入机体的开口处，将驱动体的矩形孔与机械臂的矩形孔对齐。
通过臂的矩形孔将公头针插入驱动器主体。
关键的一步：Ç UT的金属条，以适当的长度，并确保他们从驱动器机身的底部不挤出。
用公头针向下移动手臂。在公头针的两端涂上氰基丙烯酸酯胶，然后将公头针推回驱动器主体。
关键的步骤：d O不可在阳插头引脚的顶部施加强力胶过量的，因为它可以流出和臂胶水到阳接头引脚。为了进一步防止这种情况，在使用强力胶之前，在公头针的顶部和臂之间保持足够的间隙。等到胶水完全固化（15-20 分钟）。如果金属棒在驱动器底部挤出，请将它们锉平并确保该表面完全平整。
使用 00-90 水龙头通过黄铜螺母轻敲臂组件的塑料。臂孔的直径为 1 毫米（右，顶部），但 00-90 螺钉的外径为 1.2 毫米（右，底部）。
将 00-90, 1/2” 黄铜螺钉穿过驱动器主体和臂螺母。
关键的一步：中号确认阿克螺丝的头部完全推入小孔内的驱动体的顶部。
在螺丝上放一个 00-90 黄铜六角螺母。
关键的步骤：Ť完全ighten它，然后释放四分之一圈（或更少）。如果太紧，手臂不能移动，如果太松，手臂会摆动并最终对脑组织造成很大的伤害。
在螺母上涂抹助焊剂和焊料，将螺钉和螺母连接在一起。
关键的步骤：Ť RY以尽量减少焊接时间的量，因为热量过量将通过金属部件被转移到塑料。过热会降低塑料的结构完整性。
在 00-90 黄铜螺母的外表面涂上强力胶，然后将其插入底座组件。
关键的一步：中号确认阿克该螺母导向正确（右侧），并完全插入。插入后，检查是否与孔对齐（从顶部看）。
用橡皮泥密封螺母。
关键的一步：Ç EMENT需要小号到被防止编在手术期间流入该孔。
将组装好的驱动器体插入底座。
将 00-90 1/2" 黄铜螺钉插入驱动器主体并将驱动器主体固定到底座上。
关键的步骤：ħ老基部部件仍然用钳，并尝试而看到移动臂荷兰国际集团为相对于底座主体在显微镜下的任何移动。如果身体移动，则 1) 驱动器底部可能不平整；2) 后螺丝拧得不够紧， 3) 打印出来的尺寸不合适，底座和驱动器主体之间有多余的空间。
在F ully组装微驱动重0.67克并且其尺寸为3.2× 7.5 × 16 毫米（宽 x 长x高）。
附加功能：
手臂可以定制为任何尺寸。我们在 Github 页面上分享了柄长为 5 mm 的 64 和 32 通道硅探头的臂设计。
底座组件背面有一个矩形孔，可以使用牙科水泥“粘合”公头销。在多探针植入过程中，此公头针可用作临时焊接点。
关键的步骤：d O不可用强力胶来连接这个吧。使用牙科粘固剂的优点是公头针可以在手术后通过用烙铁熔化来移除。对金属棒加热可以将其从水泥中释放出来，但不能从强力胶中释放出来。小心加热，因为过多的热量会损坏基础组件。
驱动器支架上有一个孔，用于在探针恢复期间容纳此公头针，但这会使对齐更加困难。

图 2. 可恢复微驱动器的组装。请参阅上文 A 部分中的说明。

驱动器支架和立体定位附件组件（视频 1 和图 3）
在 00-90 黄铜螺母的外表面涂抹强力胶，并将其插入立体定位附件组件（图 3A）。
关键的一步：中号确认阿克该螺母的方向正确（类似于取向基地），并完全插入。插入后，检查是否与孔对齐（从侧面看）。
在公头销的一侧涂抹强力胶，并将其插入立体定位附件组件（图 3A）。
关键的步骤：Ó NCE胶水完全固化，施加助焊剂和焊料将金属条（绕高度，你希望焊接你omnetics连接器）。
插入 00-90 1/4" 不锈钢螺钉（图 3B）。
关键的步骤：w ^附接到stereotax的臂母鸡，从未拧紧该螺钉太多，因为它可以打破塑料。
在 00-90 黄铜螺母的外表面上涂上强力胶，然后将其插入驱动器支架组件的底部（图 3C）。
在 00-90 黄铜螺母的外表面上涂上强力胶，然后将其插入驱动器支架组件（图 3D）。
关键的一步：中号确认阿克该螺母的方向正确（类似于取向基地），并完全插入。插入后，检查是否与孔对齐（从侧面看）。
使用两个 00-90 1/4" 不锈钢螺钉将立体定位附件连接到驱动器支架上（图 3E，步骤 1）。
插入一个00-90 1/4"不锈钢螺丝插入驱动器保持器组件（图3E，步骤2）。
附加功能：
驱动器支架组件上有两个矩形孔，可用于插入公头针脚。这些引脚可用作硅探针的 Omnetics 连接器的临时焊接点。
驱动器支架可以通过多种方式重新设计，例如。，固定螺丝可以从侧面移到前面。

V IDEO 1 。ħ流组装驱动器保持器，stereotax附着，且可恢复微驱动

图 3.立体定位附件和驱动器支架的组装。请参见指令小号在上文B节中。

将探头连接到微驱动器（视频 2 和图 4）
使用刀片刮擦 Omnetics 连接器的表面（图 4A）。
关键的步骤：我吨重要的是提高该塑料连接器的表面，以确保Omnetics和阳头销之间更好的粘附性。
使用强力胶或牙科水泥将公头针连接到 Omnetics 连接器（图 4B）。
关键的步骤：w ^ AIT直到胶水完全固化。
用牙科水泥覆盖公头销（图 4C 中的箭头）。
关键的一步：中号阿克确保使用流动性相对较强的水泥，让它的金属条和Omnetics之间流动。注意不要让水泥流入 Omnetics 连接器。一般来说，一个公头针脚对于 32 通道硅探头就足够了，但两个应该用于 64 通道探头。
将助焊剂和焊料涂抹在公头引脚的两端（图 4D 中的箭头）。
关键的步骤：È xcessive热可熔化水泥和/或Omnetics。尝试尽快工作。
一只手握住驱动器，另一只手握住探头。将探头后端与驱动器臂对齐（图 4E）。
在手臂上涂抹强力胶或牙科水泥（图 4F）。
将探头的后端连接到手臂上。使用镊子微调探头的位置（图 4G）。
关键步骤：F或10-15秒，探头后端可以移动，对齐可以微调。
保持与stereotax附着的手，驱动保持器附接至驱动器，并拧紧螺丝（图4H）。
关键的一步：中号阿克确保它是不够紧，但不要强迫它，因为金属螺丝可以打破塑料驱动器。
将 Omnetics 连接器焊接到公头引脚（图 4I 中的圆圈）。
重新对齐驱动器支架内的驱动器（如有必要）。用手握住立体定位附件并将其倒置。松开驱动器支架的螺钉并重新对齐驱动器（图 4J）。
再次拧紧螺钉（图 4K）。
关键的一步：中号阿克确保它是不够紧，但不要强迫它，因为金属螺丝可以打破塑料驱动器。
确保硅探头的柔性电缆上没有张力（图 4L）。
关键的步骤：我F时是张力电缆上，焊料Omnetics到新的位置，其中张力被释放。

视频2 。ħ OW到硅探针附连到可恢复微驱动

图 4.将硅探针连接到可恢复微驱动器。请参见指令小号上文C节。

将铜网连接到鼠标底板（视频 3）
切割 7 cm × 7 cm 的方形铜网（图 5A）。
标记基板的内部，在该铜的中心与笔啮合并小心地切出的小剪刀的内部小号（图5B和5C）。
重新将铜网与底板对齐，并将网模塑成塑料底座的形状（图 5D）。
关键的一步：中号阿克确保铜网不会在底部伸出。
使用非常流动的牙科水泥将铜网连接到底板上 (图 5E)。
关键步骤：水泥必须是足够的液体，以便在铜网孔之间流动，以实现与塑料底座的牢固粘合。

图 5. 为小鼠准备底板。A.带底板的铜网。B.底板内部的切口。C. 在铜网中心开孔。D. 将铜网重新对准底板。E.用牙科水泥将铜网固定在底板上。

将铜网连接到大鼠底板（图 6）
切一块 8 厘米× 16 厘米的铜网。将其折叠在中间以获得8 × 8 厘米双层铜网（图 6A）。
关键的步骤：甲pply助焊剂和焊料中的不同点（图6B）。
标记所述底板的上铜网（图6C和内部6 d）。
剪下铜网。
将铜网连接到底板 (图 6E)。
关键的一步：中号阿克确保铜网不会在底部伸出。
使用非常流动的牙科水泥将铜网连接到底板上 (图 6F)。
关键步骤：如果水泥的流动性不够，则无法在铜网孔之间流动，也无法将铜网正确连接到塑料上。

图 6. 为大鼠准备底板。A.铜网折叠成正方形。B.在铜网上涂抹焊料。这将防止在手术过程中打开折叠的双层铜网。C.带底板的铜网。D. 在铜网中心开孔。E. 将铜网重新对准底板。E.用牙科水泥将铜网固定在底板上。

准备接地线和参考线（图7）
将地线剪成合适的长度并去除两侧的绝缘层（图 7A）。
将焊料涂在电线的未绝缘部分（图 7B）。
切割将被焊接到螺旋非常短的导线的端部（它应该不是比螺钉的头部更长，参见图7C）。
用明智的或帮助的手握住 000-120 1/16" 盘头螺钉，并在螺钉头上涂抹液态助焊剂（图 7D，箭头）。
在螺钉头上涂抹少量焊料（图 7E）。
关键的一步：中号阿克确保不填充与焊接螺丝刀孔。
将地线焊接到螺钉头上（图 7F）。
注意：小号撕毁在醇中的接地线（至少70％），直到手术。

图 7. 准备接地螺钉。A. 用剥线钳剥去电线绝缘层。B. 焊锡涂在导线的非绝缘部分。C.切割裸线所以认为是相同的长度与螺钉的头部。东风。在钢制接地螺钉（000-120 1/16" 螺钉）上涂抹 (D) 焊膏，并在将接地线焊接到螺钉 (F) 之前将一滴焊料附着在螺钉 (E) 上。

植入程序（视频 3）
编号步骤未显示在任何图片中。
准备立体定向仪器和工具。
将加热垫放在耳杆位置下方。
消毒手术器械。
称量动物主题。
麻醉和切口前准备。
动物在麻醉桶中以 2.5:1.5（麻醉剂 % 与气流比）麻醉 3 分钟（在它昏倒后）。
用耳棒和封闭式通风鼻夹固定动物。一旦动物在stereotax ，麻醉水平可以被降低（1.2 - 2％）。应用局部麻醉的耳棒的技巧之前inserti纳克他们进入耳朵（LMX-4利多卡因4％药膏）。
使用 Nair 脱毛器或毛发修剪器去除手术切口周围动物头部的皮毛。
无毛皮肤用消毒液（聚维酮碘 - 10% 外用溶液）清洁。皮肤是由三个单独的防腐剂清洁清洗，p与KIMTECH erformed由前至后挥动湿巾。最后一次刷卡必须一次性完成，以尽量减少感染。在每次滑动之间，用 70% 的酒精清洁皮肤。
切口和颅骨清洁。
沿头皮中线皮下注射布比卡因 (0.4-0.8 ml/kg 0.25% 溶液) 作为局部麻醉。做一个注射部位并沿中线分布麻醉剂。
从眼睛的位置到头骨的后部（颈部）做一个正中切口。
皮肤从头骨上松开，拉到一边，用四只斗牛犬固定。斗牛犬附着在第二层皮肤上。
用锋利的物体 (镊子或手术刀) 刮掉头骨, 以去除头骨顶部平坦表面上的任何组织。这最大限度地减少了电噪声伪影，并确认了 3D 打印底座的牢固结合。
用生理盐水和真空抽吸清洁头骨。
用过氧化氢清洁头骨并用盐水冲洗。过氧化氢是用棉签涂敷（约5小号）和快速冲洗和彻底用盐水其后。
烧灼任何出血以及头骨和暴露的皮肤。
将底座固定在头骨上。
混合基地四滴用一个催化剂的下降。用刷子在清洁和干燥的头骨的整个表面上涂漆，然后让它干燥（图 8A）。混合Metabond的新的解决方案以粉末：4碱基的滴，催化剂一滴，和2粉末的勺和与Metabond油漆颅骨表面。注意沿着头骨表面的边缘涂漆。
关键的一步：P repare的Metabond冰，因为它会延长工作时间。我们建议使用透明粉末，这样可以看穿它（缝合线和颅骨标志仍然可见）。
用 Unifast LC 水泥（箭头）在 3D 打印底座的底部表面涂漆，将其对准头骨上方，并在头骨凝固之前将其连接到头骨上（图 8B）。
关键的步骤：P的位置处远离所述感兴趣区域是不是仅将基本的一小部分。此步骤有助于快速将底座连接到头骨。
这一步也可以用 metabond 进行，但固化需要更长的时间。
使用蓝光（10-20秒，图 8C）固化 Unifast LC 。
沿着帽子底座和头骨之间的内部接触线用相对流动的牙科水泥涂抹，在帽子内部形成一个密封区域（图 8D，黑色箭头 - 已经密封的一侧，白色箭头 - 尚未密封）。
关键的一步：牛逼他巩固应该是液体足以能够颅骨和底座之间流动。
完成后的结果应该像图小号12A〜12 ℃。

图 8. 在啮齿动物中植入硅胶探针。“手术”是在 3D 打印的小鼠头骨上进行的。请注意，所有这些步骤对于小鼠和大鼠都是相同的。

开颅标记和螺钉放置。
将 Bregma 和 Lambda 对齐在同一水平面上。使用立体定向坐标与连接到立体定向臂的细注射器针头确定 Bregma 的位置。
计算探针切口点的相对位置。
用手术刀和笔标记开颅手术的位置（用笔填充手术刀绘制的线条）。
用手术刀/笔标记参考和接地螺钉的位置。
取出立体定向臂。
用钻头 (0.7 毫米) 在小脑上钻孔用于接地螺钉。如果发生出血，用生理盐水冲洗并真空抽吸直至出血停止。拧入接地螺钉（图 8E）。从轻微的逆时针转动开始。
关键步骤：F或小鼠，留出约 0.5 毫米的余量（约钳子的高度）。在老鼠身上，拧紧螺丝。在螺杆的头位置，例如，接地电缆不是方式我n中的方式（朝外）。
注：125 µm 钢丝也可代替螺钉用于参考和接地。
用牙科水泥覆盖并完全密封接地螺钉（图 8F，箭头）。
注：w ^ ê推荐使用Unifast LC水泥，因为它可以在20和被完全固化小号。
开颅手术。
使用0.7 -毫米钻头，准备开颅（图8G）。用盐水和真空抽吸冲洗以确保钻孔时的可见性。
关键步骤：C用钻头或刮削/锋利的铲刀工具靠在开颅手术周围。用钩形针在探针的切口处取出硬脑膜：弯曲 30G 针的尖端形成钩形，以形成更好的抓握角度，在不损坏皮质的情况下拉动硬脑膜。您可以在用针尖向后拉的同时提起硬脑膜，然后用手术刀进行切割。避开血管。在开颅手术中涂抹生理盐水和明胶海绵，以保持大脑表面湿润。
探针植入。
将带有硅探针的植入工具连接到立体定位臂，并根据指定的表面坐标定位硅探针（图 8H）。
关键的步骤：d RIVE硅探针到大脑的表面并标记背腹坐标。将探头植入所需的目标深度。
用牙科水泥将微驱动器的底座连接到头骨和帽子底座上（图 8I）。
关键的步骤：ü本身相对液体牙科水泥让它颅骨和基座部件之间流动，但要小心，不要让它流入开颅。切勿触摸微驱动器。如果差距太大，开始从头骨建立水泥。
注：w ^ ê推荐使用Unifast LC水泥，因为它可以在20和被完全固化小号。由于此步骤可能需要多轮应用牙科水泥，因此快速固化可以在整个手术过程中节省大量时间。
用牙科水泥填充底座组件和颅骨表面之间的所有间隙 (图 8J)。
将硅胶涂抹在开颅手术上，让硅胶沿着小腿运行，完全密封开颅手术。这可以长期保护大脑并限制出血和凝血（图 9K）。
注意：甲lternatively石蜡油/蜡应用于与窄镊子和热（使用焊接头）的开颅手术。
使用 T2 螺丝刀松开驱动器支架的螺钉（图 9L）。
从立体定位附件中分离探针 PCB（图 9M，黑色圆圈）。
关键的步骤：大号AY向下铜探头PCB啮合，并确保有在柔性电缆没有张力。
向上移动立体定位臂（图 9N，虚线箭头）。
关键的步骤：中号onitor柄而与stereotax向上运动。如果有柄的任何运动，立即停车检查是一切都正确对齐。
为老鼠建造一个铜网笼。
将公头针（图 9O，箭头）连接到塑料底座/头骨。用镊子夹住金属棒，直到牙科水泥用蓝光固化。
关键步骤：将金属棒B端（制作成 100-120 度角的 L 形）并将牙科水泥涂抹到金属棒的这个短弯曲部分，并将其连接到底座上。在将金属条连接到底座之前，请确保将金属条切割到适当的高度。
将焊料涂在金属棒的尖端（图 9P，箭头）。
关键的步骤：d O不可应用的热过量（焊接的长的时间），因为由金属传递的热可以熔化的牙科用粘固剂使铜的结构恶化啮合笼。
将探针 PCB 连接到在上一步中安装的公头针（图 9Q）。
在剩余的三个角上再连接三个公头针（图 9R，箭头）。在所有的尖端上涂上焊料。
在一侧连接一个公头针。重复剩余的开放边（图 9S）。
关键的步骤：Ç旦是金属棒到适当的长度的长度它焊接到笼之前。
沿着对角线切割铜网，一直到塑料底座（图 9T）。
折叠铜网并将其切割到适当的高度（图 9U，箭头）。
将铜网焊接到公头针脚上（图 9V）。
在所有侧面重复切割、折叠和焊接（图 9W）。
使用焊料将接地线从探针 PCB 和接地螺钉连接到铜网（图 9X）。
关键步骤：以不阻止访问微驱动器螺钉的方式排列笼子内的电线。
注意：如果使用单独的接地线和参考线，请相应地连接它们。
如有必要，使用镊子的手柄（图 9Y，圆圈）平滑边缘。如有必要，用焊料固定边缘。

视频3 。P鼠标底板的赔偿和硅探头的植入

图 9. 啮齿动物 (KN) 中的硅胶探针植入和小鼠 (OY) 中的帽构建。“手术”是在 3D 打印的小鼠头骨上进行的。请注意，小鼠和大鼠的 KO 步骤是相同的。

为老鼠建造一个铜网笼。
沿着对角线切割铜网，一直到塑料底座（图 10O）。
重复其余三个角（图 10P）。
折叠铜网并使用焊料连接部件（图 10Q）。
如有必要，使用镊子的手柄平滑边缘（图 10R）。
关键的步骤：中号AKE确保有围绕塑料基材没有尖锐的边缘。
使用剪刀，将铜网的高度剪到合适的四周高度（图 10S）。图 10T 显示了完成的步骤。
使用大表面抹刀 (图 10U) 用相对流动的牙科水泥涂抹铜网的外表面。
关键的一步：中号阿克确保牙科水泥不滴到了皮毛或大鼠的脸。确保塑料底座-铜网连接被正确覆盖（如果没有完全覆盖，它会引入很多肌肉伪影）。
注：w ^ ê推荐使用Unifast岛水泥。
用牙科水泥覆盖铜网的顶部（图 10V）。
注：˚F ollow指令如所示图10U。
步骤没有在示出的图：焊料探针PCB的阳头销的铜网。将探针接地和接地螺钉的电线焊接到铜网上。
用 Coban TM胶带覆盖顶部。关闭麻醉并从立体定向设置中释放动物。

图 10. 大鼠的帽构建。“手术”是在 3D 打印的大鼠头骨上进行的。

麻醉后。
再次称量动物以确定冠的重量。
把动物放在一个没有床上用品的笼子里，第一天晚上把笼子放在加热垫上。
20 分钟 (0.0 5 -0.1 毫克/公斤)后皮下注射丁丙诺林。
一般注意事项。
定期将矿物油涂抹在动物的眼睛上。
为了让动物在最初几天保持水分，请提供一个水凝胶和一个装有水的小容器。提供定期的啮齿动物药丸。

探针恢复程序（视频 4 和图 11）。
使用立体定向框架将驱动器支架与驱动器对齐。一旦位置在 xy 平面中对齐，向下移动驱动器支架（图 11A，步骤 1）。接下来，用位于驱动器支架侧面的螺钉固定驱动器顶部（图 11A，步骤 2）。
关键的步骤：d O不可拧紧螺钉过于强烈作为金属螺钉可以打破塑料驱动器。
从底座上松开后螺钉（图 11B，步骤 1）并小心地向上移动驱动器（图 11B，步骤 2）。
关键的一步：中号onitor在显微镜下探头的整个恢复过程中与柄，如果发现探头的任何意外移动，返回到上一步，以确保一切正确固定。
从立体定位臂上松开立体定位附件并清洁探头。存储连接到立体定位附件的探头。
注意：Ť他探针可以通过在蒸馏水中，然后隐形眼镜溶液（含蛋白酶）和蒸馏水再次最初漂洗清洗; 每个洗涤步骤应持续至少 12 小时。如果在小腿之间检测到额外的组织或碎片，可以在显微镜下用细针将其去除。另一种清洁探针的方法是将其插入 2-4% 的琼脂糖凝胶几次。这会将任何碎屑推离小腿沿线的位置。

视频4 。ħ OW使用可恢复的微驱动以回收硅探针

图 11. 探针恢复。A. 植入工具连接到微驱动器（步骤 1）并用黑色螺钉固定（步骤 2）。柔性电缆和 Omnetics 连接器未显示。B. 完全松开后螺丝（步骤1），将微驱从底座上拆下；然后，使用立体定向机械手提升植入工具（步骤 2），植入探针。C. 完全恢复的微驱动器和硅探针，带有柔性电缆和 Omnetics 连接器。可以清洁探头柄并连接新的微驱动器底座，使整个设备准备好重新植入新的动物对象。

图 12，面板s DG 显示了混合底座的广泛适用性，用于具有温度操作和光纤刺激的硅探针记录。

图 12. 混合基础的适用性。A. 底座连接前暴露的头骨。公元前。附加混合帽系统的特写 (B) 和宽视图 (C)。D. 带有被动冷却、热敏电阻和硅探针的 Peltier 冷却装置植入两个不同的插入部位。E. 带有用于冷却、热电偶、电线和硅探针植入物的主动式 20 毫米电风扇的 Peltier 冷却装置。F. 已植入干冰冷却室的双侧 CA1 探针植入物（在植入左半球植入过程中显示）。G. 用于光遗传学实验的病毒注射动物。四个直径为 50 微米的光纤与两个二极管以及一个硅探针一起植入 CA1。连接了两个二极管（蓝色条），用于通过安装在天花板上的摄像头进行头部位置跟踪。面板 AC 和 EG 来自Petersen 和 Buzsáki ( 2020) 。图 D 中显示的大鼠来自一项未发表的正在进行的研究。所有图片都是 Long Evans 大鼠。

笔记

仅在去年，我们实验室的成员就对数百只啮齿动物（小鼠和大鼠）进行了侵入性硅探针植入手术，并且在过去几年中，我们的大多数探针植入都使用了基板系统的变体。根据个人估计（两只大鼠和三只小鼠研究人员），使用大鼠和小鼠基础系统在手术过程中节省了大约 3 0 -60 分钟。此时最初被用在建立牙科用粘固剂周长和用于锚定颅骨螺钉和钻孔开颅手术上附着铜网本牙科粘固粉碱（Vandecasteele等人，2012）。
根据最近基于大约 25 个带有可恢复微驱动器的硅探针的内部调查，平均每个探针被回收两次，并成功地重新植入新的动物对象。在 48 次恢复尝试中，只有 5 次失败。如果没有手术/植入相关并发症的时间，所有用户都能够成功恢复硅探针。凝结的血液，干燥骨蜡，或碎屑附着到柄是最常见的原因小号并发症导致失败探针恢复。在这些情况下尝试恢复探针之前，我们建议将植入的硅探针在盐水中浸泡至少 10分钟，并尽可能多地事先去除碎片。与 1-2小时相比，恢复过程平均需要 30分钟（Vandecasteele等，2012）。

致谢

我们要感谢 Royer、Diba 和 Buzsaki 实验室的早期适配器测试微驱动器和基板并提供反馈。我们还要感谢 Dmitry Rinberg 对设计的建议和反馈。这项工作得到了 U19 NS107616、U19 NS104590、R01 MH122391、NeuroNex MINT (NSF 1707316) 和灵北基金会的支持。底板是为 Petersen 和 Buzsáki (2020) 以及 Vöröslakos等人开发的。(2020)，微驱动器是为 Vöröslakos等人开发的。(2020) 。

利益争夺

EY 是 NeuroLight Technologies 的联合创始人，NeuroLight Technologies 是一家营利性神经技术制造商。其余作者没有利益冲突。

伦理

所有实验均获得纽约大学医学中心机构动物护理和使用委员会的批准。

参考

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