材料和试剂

正方形皮氏培养皿（100 毫米×100mm的，北京- [R uiaizhengte 乙iological Ť 童占梅Ç O操作。，大号TD 。目录号：YC-HC99050 ）
培养皿（150 mm ，康宁，目录号430599 ）
1.5毫升微管（AXYGEN，目录号：MCT-150-C）
移液器吸头（AXYGEN，目录号：T-200-Y和T-1000-B）
微孔胶带（3M，Micropore TM ，目录号：1530C-0）
封口膜（Bemis，目录号：PM-996）
Toothp ICK （Suncha，目录号：YQ125 0 ）
黑布（北阳，货号：13000133 ）
拟南芥
斜纹夜蛾（Keyun）（https://item.taobao.com/item.htm?spm=a1z09.2.0.0.10672e8dnlXuwi&id=567208183626&_u=pmk8luh1123）
人工饲料（我ngredients ：小麦胚芽，酵母，角叉菜胶，魔芋粉，山梨酸，维生素C，玉米油，和亚油酸;克运）
（https://item.taobao.com/item.htm?spm=a1z09.2.0.0.10672e8dnlXuwi&id=43498077050&_u=pmk8luh74e5）

Murashige＆Skoog含维生素的基础培养基（Phyto Technology Laboratories，目录号：M519）
细菌琼脂（BD，Bacto TM ，货号： 214010）
10％漂白剂（KAO，600米升）
1 M KOH溶液（甲laddin，目录号：P112281 ）
蔗糖（国药集团化学试剂有限公司，公司，。目录号：10021418）
乙醚（国药化学试剂有限公司，目录号：100 09328 ）
无菌蒸馏水
营养土壤（苔藓泥炭：ver 石= 2：1，PINDSTRUP，类型：0-10 mm ）
½MS 介质（请参见食谱）
0.8％琼脂培养基（请参见食谱）

设备

移液器（吉尔森的Pipetman ® G）
量筒
[R eagent瓶
冰箱或冷藏室
Ť weezers
植物生长室
方锅
高压釜
层流罩
平衡
佳能相机
统治者

软件

微软Excel

程序

拟南芥植物的栽培
1. 准备½ MS 固体介质，并且p 提供了足够的介质成正方形P ETRI 菜 ES （100 毫米× 100mm）上，以覆盖约一半的所述深度培养皿（40米升）。

2. 表面除菌拟南芥种子中1.5米升微管通过在浸泡10 ％的漂白剂为15 分钟，T 他N r个通过用漂洗五次EMOVE所有漂白残余物无菌蒸馏水中。

3. 母猪在种子正方形培养皿含有ES ½ MS 介质（图1A），和s EAL 碗碟带麦克风ropore胶带。

4. 将培养皿在4 °C 的黑暗环境中放置2 天，以实现高效同步发芽。

5. 转让菜向生长室在设定22 ℃下用一个10小时的光/ 14小时黑暗光周期为10 一天秒。

6. Ť ransplant 的苗成方形盆˚F illed与营养土壤（图1B），并保持它们在所述生长室中（22 ℃下，10小时光照/ 14小时黑暗）另外4周（图1C）。

注意：注意不要损坏幼木的根部。照顾好植物，以防它们受到草食动物或病原体的影响。

D：\ Reformatting \ 2020-1-6 \ 1902815-- 1291 Chuanyou Li 810740 \ Figs jpg \图1.jpg

图1. 牛逼他ç ultivation 的拟南芥植物。A. 小号terilize d 拟南芥种子被播种上的正方形培养皿含有½ MS培养基。B.十日龄拟南芥幼苗是牛逼ransplant 编入充满锅营养土壤。C. 拟南芥幼苗盆栽4周长大的用于我NSECT ˚F eeding 一个SSAY 秒。

Spodop tera exigua 幼虫的制备
将Spodoptera exigua 鸡蛋放在方形的Pétri 盘中，并用Micropore胶带密封盘（图2A）。
放置在培养皿2 7 ℃的培养箱中以40-50％的相对湿度下孵化（约2 - 3天）。
卵孵化后，立即添加对菜进行日常饮食（图2B），并继续孵育5天。
注意：C UT 的一个rtificial饮食成小块的1 - 1.5 厘米见方，并放置他们在该陪替氏培养皿在从卵或幼虫以一定的间隔。通常，在喂食5天后，幼虫变成三龄幼虫。

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图2. 牛逼，他孵化的甜菜夜蛾卵。A. 斜纹夜蛾卵。乙。新孵化的幼虫和人工饮食。

用牙签吨转让（BOT）的幼虫Ë 在到一个新的Petri 培养皿（视频1和图3A）和饿死他们12小时在实验中使用之前（图3B）。
注意：此步骤需要小心轻柔。通常情况下，我们ü 知的水浸泡过的牙签升等的幼虫Ë 捕捉并轻轻地转移幼虫，以防止他们受伤。

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图3.饥饿处理的甜菜夜蛾幼虫。A.幼虫抓着牙签。B.将T HIRD - 龄幼虫Ë 饥饿d 12小时。

视频1. 如何用牙签捕捉幼虫？

在教派˚F eeding 一个ssays
1. 准备并把我们足够的0.8％琼脂倒入塑料中培养皿（150 mm）大约覆盖培养皿深度的一半。

2. 从在土壤中生长的拟南芥植物切下类似大小的成熟莲座丛叶，历时4周，然后将它们放入盛有0.8％琼脂的塑料陪替氏培养皿（150毫米）中（图4A ）。

注意：如果不同基因型的叶子的形状和大小相似，我们通常以图4A所示的方式排列它们。而且，如果叶子的形状和大小相差很大，则需要每次称重叶子，以确保添加相同重量的叶子。

3. 使用一块浸透水的牙签至g ently 转移15个饥饿第三- 龄幼虫Ë 到所述培养皿含有莲座叶。

注意：此步骤需要小心轻柔。

4。小号EAL 的培养皿ES 用微孔带，并把它们在生长室（22 ℃下，10小时光照/ 14小时黑暗）。

5. 喂食幼虫3天（图4B ），并每天用新鲜叶子代替每个培养皿中的叶子。

注：在时间添加鲜叶，以保证幼虫公顷已经足够的食物。在F eeding 天可以根据需要调节的实验条件。

由于植物激素Ĵ asmonate（JA）中扮演一个重要的调节对草食动物攻击植物防御反应的作用，我们进行了昆虫饲养试验使用野生型（WT）植物和coi1-2 MUT 蚂蚁，其港口的点突变该JA受体基因晕斑INSENSITIVE1 （COI1 ）（Xu等人，2002），并比较它们的电阻的甜菜夜蛾幼虫（图小号4C 和4D ）。

科尔的实验结果挠度
1. 经过三天内进行付运的馈送，转移幼虫到一个新的培养皿中，并称重所有甜菜夜蛾从每个培养皿幼虫。

2. 将一个棉球浸泡在乙醚中的培养皿，并且s EAL 培养皿用封口膜。

3. 当larv 一个ë 是无意识的，使用一个小的对镊子至g ently 将它们放置在黑色布料，arrang È 他们从大至小，并采取照片（图4C）。

注：S TEP 小号d 1和d 3 要轻柔，防止幼虫被受伤，吐出绿色的口腔分泌物。

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图4. 昆虫˚F EEDI 纳克一个ssays用甜菜夜蛾幼虫。A.将成熟的莲座丛叶切下并置于含有0.8％琼脂的塑料陪替氏培养皿（150mm）中。B. 由斜纹夜蛾幼虫取食1天后的叶子。C. Spodoptera exigua 幼虫取食WT和coi1-2 植物的莲座叶3天后。比例尺= 1厘米。D. 用WT和coi1-2 植物的莲座叶喂食的幼虫的平均体重3天。数据代表平均值± SD（n = 3 ）。星号指示从显著差异WT 根据学生吨- 在**，试验P <0.0 1。

数据分析

计算每道菜中每个幼虫的重量，并计算平均值。统计分析应通过计算平均值来完成的3 独立实验小号和S ^ 使用Microsoft Excel TANDARD偏差或任何其他统计分析软件。Signific 的differenc的ANCE ë 两个样本之间可以通过执行学生获得吨-test （图4 d ）。通常，幼虫ē 吃树叶后生长良好。在某些情况下，一个或两个幼虫ê 会死，并避免使用死幼虫Ë 进行分析。否则，收集所有幼虫进行数据分析。

菜谱

½MS 培养基
2.215 g含维生素的Murashige＆Skoog基础培养基

10克蔗糖

8 克琼脂

加入ddH 2 O至1,000 ml

用KOH 调节pH值至5.8

在15 psi ，121 °C下高压灭菌15分钟

0.8％琼脂培养基
8克甲GAR

加入ddH 2 O至1,000 ml

在121 °C下高压灭菌15分钟

致谢

这项工作得到了中国科学院的战略重点研究计划（Grant XDB11030200），中国科学技术部（Grant 2015CB942900）和国家自然科学基金（Grants 31730010和31770303）的支持。该协议被改编˚F ROM 在你所描述的方法等。（2019）。

利益争夺

作者宣称他们没有竞争利益。

参考文献

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Hu，P.，Zhou，W.，Cheng，Z.，Fan，M.，Wang，L.和Xie D.（2013）。JAV1 控制茉莉监管的计划牛逼的防守。摩尔电池50 （4 ）：504-515。
Xu，L.，Liu，F.，Lechner，E.，Genschik，P.，Crosby，WL，Ma，H.，Peng，W.，Huang，D. and Xie，D.（2002）。SCF COI1 泛素-连接酶复合物是拟南芥茉莉酸酯响应所必需的。植物细胞14 （8 ）：1919-1935。
You，Y.，Zhai，Q.，An，C. and Li，C.（2019年）。LEUNIG_HOMOLOG 米ediates MYC2- d ependent 吨ranscriptional 一个ctivation在ç 与ooperation Ç oactivators HAC1和MED25。植物细胞31 （9 ）：2187-2205。