材料和试剂

八周大的Wistar（或其他应变）大鼠（体重200-250g）
8周龄的Swiss小鼠或各种转基因/敲除小鼠（体重20-25g）
无菌生理盐水（0.9％NaCl溶液）（Thermo Fisher Scientific，目录号：BR0053G）或用于测试物品的其他载体
甲醛溶液（37重量％的H 2 O）（Sigma-Aldrich，目录号：252549）
5％福尔马林的盐水溶液（见配方）

设备

体重（体重0.01-2000克）（深圳市安普电子科技有限公司，目录号：APTP452）和老鼠（范围0.01-300克）（深圳市安普电子科技有限公司，目录号：APTP457B） >
永久黑标记（Thermo Fisher Scientific，目录号：S02727）
具有铰链盖的单个透明聚碳酸酯观察室（福尔马林试验室：大鼠为30×20×15cm，小鼠为15×15×15cm）
镜子（建议两个或多个镜子覆盖实验区域）
厚棉袋，开口端
具有28-G针（Thermo Fisher Scientific，目录号：22-004-271）或50-μl具有30-G针的Hamilton注射器（Hamilton Company，目录号：80508）的0.5ml注射器
手持式计数器
计时器（推荐两个计时器）

图1.大鼠福尔马林试验的示例准备

软件

Prism软件（版本5.01，GraphPad Software Inc.）

程序

从家笼中取出动物，并记录其体重。标记将用福尔马林注射永久性黑色标记的后爪。
将标记的动物放入福尔马林测试室，将在测试期间使用。将镜子放在容器后面和侧面，以确保从所有角度都能看到后爪。建议使用两个镜子，一个在动物后面，另一个在动物旁边或下面。允许动物适应15至30分钟。
制备盐水中的5％福尔马林溶液。对于大鼠，在装有28-G针的0.5-ml注射器中加载50μl的5％福尔马林; 对于小鼠，在装有30-G针的50-μlHamilton注射器中装载10μl5％福尔马林。为每个待测试的动物装上一个福尔马林注射器。
从其容器中取出动物，并将其放在厚棉布袋中，标记的后爪外侧在开口端（厚的棉袋用于限制动物运动时，福尔马林注射）。将5％福尔马林溶液注入爪子的背面，将针头放在脚趾上方，脚踝下方，将其插入皮肤表面下方。

图2.显示对大鼠A和小鼠B的福尔马林注射的实施例照片 a和b显示用于大鼠和小鼠的注射器; c和d分别表示大鼠和小鼠的注射部位
立即将注射的动物返回到其容器中，并启动计时器以标记I期的开始。在福尔马林注射后，爪的退缩是大鼠中最一致的行为反应。相反，小鼠主要显示爪舔行为
重复福尔马林注射剩余的动物。尽一切努力尽快完成注射。通常，一个研究者可以在单个实验批中监测六只大鼠或两只小鼠。
1. 对于大鼠，观察第一只大鼠1分钟并计数注射后爪的退缩。对剩余的5只大鼠重复。当观察到第六只大鼠时，重复从开始的序列第一只大鼠在1分钟的时间间隔以10分钟的间隔立即开始福尔马林注射后90分钟后结束。第一阶段反应发生在前1分钟，而II期反应发生于在福尔马林注射后20-90分钟。
  1. 当量化衰退时，a 脚的轻快高度被评分为单个退缩。有时，动物可能表现出几个不可能的快速衰退量化。这些情节通常被计为一个计数。
2. 对于小鼠，观察5分钟，并记录在此期间舔舔所花费的时间期。注射下一个鼠标5分钟后第一个和记录舔时间。然后在20-40分钟后观察福尔马林注射。
  1. 与大鼠一样，I期和II期分别在注射福尔马林后0-5分钟和20-40分钟出现
  2. 建议在运行测试之前使用兴趣，调查人员注射几种对照动物熟悉本身与在其间发生的不同的退缩行为阶段I和II。
3. 参考视频1的福尔马林注射程序和福尔马林诱导的大鼠和老鼠的退缩行为。
  
  视频1.福尔马林注射程序和福尔马林诱导的大鼠和小鼠的衰退行为
记录在I期和II期每只动物的大鼠退缩总数或小鼠总舔时间。重复步骤1至8，直到研究了每个治疗组中所需数量的动物（例如，n = 6-8）。每次运行时，建议尽可能多地平行处理。
执行数据分析以确定统计显着性。对于大鼠，数据可以表示为阶段I和II的每分钟总衰退（图3A）。可以使用Prism软件（Gong等人，2014a; Gong等人，2011年），计算10-90分钟内曲线下面积（AUC） ; Gong等人，2014b; Gong等人，2014c; Zhang等人，2013）。对于小鼠，数据可以表示为I期（急性期）0-5分钟期间的总舔食时间和II期（强直期）（图3B）20-40分钟的总舔食时间（Gong等，，2012; Lu 等人，2012; Zhu 等人，2014）。

图3.来自大鼠A和小鼠B的福尔马林试验的典型数据在大鼠福尔马林试验中，通过计数在1分钟时期内注射福尔马林的爪爪的数量来定量伤害行为对大鼠。在大鼠中皮下注射福尔马林产生特征性的双阶段急性反应，其由初始的，快速衰变的急性期（I期，在福尔马林注射后10分钟内），随后缓慢上升和长期（10-90min）相（II期）。在小鼠中，通过计数总舔时间来定量伤害行为。皮下注射福尔马林在小鼠中产生特征性的两阶段舔反应，其由初始的快速衰变的急性期（I期，在福尔马林注射后5分钟内），随后缓慢上升和长期（20-40分钟）强直相（II期）。数据表示为平均值±SEM（每组n = 6）。更具代表性的数字已经在其他地方公开（Gong等人，2014a; Gong等人，2011; Gong等人，2014b; Gong等人，2012; Gong等人，2014c; Lu等人，2012; Zhang等人，2012;/em>，2013; Zhu ，，2014）

食谱

5％福尔马林的盐水溶液
50μl甲醛溶液（37重量％在H 2 O中）
950μl无菌生理盐水（0.9％NaCl溶液）

致谢

这项工作得到了中国国家自然科学基金（No.81374000），中国教育部博士生导师基金（No. 20110073110062）和中国教育部授予前授予奖学金。来自中国教育部，上海交通大学和中国药科大学。

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