Respiratory Microbiome Transplantation in Germ-free Mice

背景

在过去的十年中，人类对微生物组的研究主要集中于肠道和其他富含微生物的环境，逐渐扩展至先前被认为是无菌的部位例如肺部。早期对肺部细菌的鉴定依赖传统细菌培养技术，但该方法对于细菌种类的检测具有局限性。随着分子生物学技术的发展，通过采集肺泡灌洗液或痰液样本，结合测序技术识别肺部微生物组, 至此肺部微生物组研究进入了新的发展阶段。
已有研究揭示肺部微生物群与多种肺部疾病如哮喘、慢性阻塞性肺疾病、囊性纤维化、肺癌的关系。其中肺部微生物失调被认为是许多慢性肺病的重要诱因或加重因素，某些特定微生物的过度增殖或缺乏与疾病的严重程度和进展密切相关。无菌小鼠由于其绝对无菌的微生物背景使其成为人体微生物组研究的理想模式动物和核心技术工具。可通过无菌小鼠肺部微生物移植模型直接研究肺部菌群和人类健康或疾病的因果关系，是人体微生物组和疾病微生物组研究的重要方法。通过该模型的建立，以提高对肺部微生物组在呼吸道疾病中作用的理解，推动呼吸道微生物组的发展。未来也可以开发通过饮食、益生菌或选定的细菌移植来改变呼吸道微生物组，成为呼吸道疾病的新治疗策略。

材料与试剂

1. 生理氯化钠溶液（四川科伦药业股份有限公司，货号：B14200853444）
2. 磷酸盐缓冲盐（碧云天生物技术公司，Beyotime，货号：C0221A）
3. 过氧乙酸（广州瑞思特医疗科技有限公司，货号：PD0028）
4. 甘油（Millipore Sigma, 货号：G7893）
5. 三溴乙醇（Sigma-Aldrich，货号：75-80-9）
6. 75%酒精（山东利尔康医疗科技股份有限公司）
7. 1 mL无菌注射器（上海康德莱企业发展集团股份有限公司，货号：60017031）
8. 手术剪（上海医疗器械有限公司手术器械厂，货号：Y00030)
9. 眼科镊（海斯迪克，货号：HKCL-20）
10. 留置针（贝朗梅尔松国际医疗有限公司，货号：4254511-03）
11. 棉线（深圳众石科学仪器有限公司，货号：10203）
12. 1.5 mL离心管（Thermo Scientific Nunc，货号：32195455321）
13. 脑心浸出液培养基（Thermo Scientific，货号：CM1032B）
14. 胰蛋白胨大都肉汤（Thermo Scientific，货号：CM1016T）
15. 哥伦比亚CNA血琼脂平板（9 cm）（青岛海博生物，货号：HBPM0153）
16. 厌氧产气袋（Mitsubishi,广州科荣生物有限公司，货号：MGC-016）
17. 除菌过滤器（默克，Millipore，货号：SLGP033R）
18. N-乙酰-L-半胱氨酸（Macklin，货号：N800425）
19. 气管插管（南京卡尔文生物科技有限公司，货号：KW-800）
    

仪器设备

1. 离心机（Thermo Fisher Scientific, 货号：thermo FRESCO 21）
2. -80 ℃超低温冰箱（Thermo Fisher Scientific, 货号：902GP-ULTS）
3. 高温高压灭菌器（山东新华医疗器械股份有限公司，实验动物专用型灭菌器，货号：BIST-A-D910-D-B）
4. 实验室匀浆机（YL/友联仪器，货号：FSH-2A）
5. 洁净工作台（苏净安泰空气技术有限公司，AIRTECH，货号：BCM-1000A）
6. 微生物培养箱（Thermo Fisher，货号：IMH180）
7. PH计（梅特勒托利多，货号：FE28）
8. 小鼠气管插管辅助台（淮北达斯加尔生物科技有限公司，货号：DS-CGT）
   

实验步骤