Improve Research Reproducibility A Bio-protocol resource

利用SPR方法对人尿液中多蛋白组分定量分析

Multi-protein Quantitative Analysis in Human Urine Using Surface Plasmon Resonance

杨 杨姝*
郑 郑非凡*
陈 陈媛媛
张 张璐璐
杨 杨真威

*Contributed equally to this work 发表时间: 2023年08月03日 DOI: 10.21769/BioProtoc.1011000 浏览次数: 1196

返回专辑目录

表面等离子体共振（SPR）技术实验手册
pdf PDF PDF
ask 提问与回复
引用
收藏
被引用
摘要: 表面等离子共振（SPR）方法可同时在芯片表面不同通道偶联多个蛋白，待测样品顺序流经各个通道时，会产生和相应偶联蛋白的结合信号，因此可实现同时对样本中多个蛋白定量的目的。在本研究中，为了实现肾病的快速诊断，需从人尿液中寻找肾病蛋白标记物。实验中，将人血清清蛋白（human serum albumin, HSA）抗体，beta-2微球蛋白（beta-2-microglobulin, B2M）抗体，kappa轻链蛋白（kappa light chain）抗体和lambda轻链蛋白（lambda light chain protein）抗体偶联在CM5芯片表面，再利用人血清清蛋白、beta-2微球蛋白、kappa轻链蛋白和 lambda轻链蛋白的标准品梯度稀释作为分析物建立标准曲线。利用这些标准曲线，同时检测人尿液中四种蛋白的含量。在正常人和肾病患者尿液中，HSA和B2M表达量存在显著差异，因此HSA和B2M可以作为肾病诊断的蛋白标记物。此方法可以同时检测人血清清蛋白和beta-2微球蛋白，具有良好的灵敏性，可重复性和特异性。

Keywords: 肾病诊断 search 人尿液 search 人血清清蛋白 search beta-2微球蛋白 search 标准曲线 search

材料与试剂

  1. CM5芯片
  2. PBS-P+ buffer,10× 缓冲液 (0.2 M phosphate buffer, 27 mM KCl and 1.37 M NaCl, 0.5% Surfactant P20, pH 7.4, Cytiva Company)
  3. 人血清清蛋白及其特异性抗体 (Bio-Rad Company)
  4. beta-2微球蛋白及其特异性抗体 (Sino Biological Inc,China)
  5. kappa轻链蛋白及其特异性抗体 (Bio-Rad Company)
  6. lambda轻链蛋白 (Bio-Rad Company)，其特异抗体 (Exbio Praha)
  7. N-hydroxysuccinimide (NHS) (Cytiva Company)
  8. N-(3-dimethylaminopropyl)-N′ -ethyl carbodiimide hydrochloride (EDC) (Cytiva Company)
  9. 10 mM醋酸钠 (Cytiva Company)
  10. 乙醇胺（GE Healthcare）(Cytiva Company)
  11. 甘氨酸盐酸pH1.5 (Cytiva Company)
  12. 牛血清白蛋白 (BSA)
  13. NaCl, NaOH, 甘油以及其他试剂 （北京华泰昕生物医疗技术有限公司）
  14. Running buffer（见溶液配方）

仪器设备

  1. Biacore T100 (Cytiva Company)
  2. SORVALL LEGEND MICRO 17R Centrifuge (Thermo scientific)
  3. Millipore超纯水仪

实验步骤

Copyright: © 2023 The Authors; exclusive licensee Bio-protocol LLC.
引用格式：杨姝, 郑非凡, 陈媛媛, 张璐璐, 杨真威. (2023). 利用SPR方法对人尿液中多蛋白组分定量分析. // Surface Plasmon Resonance (SPR) Protocol eBook. Bio-101: e1011000. DOI: 10.21769/BioProtoc.1011000.
ris ris 下载引用格式
How to cite: Yang, S., Zheng, F. F., Chen, Y. Y., Zhang, L. L. and Yang, Z. W. (2023). Multi-protein Quantitative Analysis in Human Urine Using Surface Plasmon Resonance. // Surface Plasmon Resonance (SPR) Protocol eBook. Bio-101: e1011000. DOI: 10.21769/BioProtoc.1011000.
ris ris Download Citation in RIS Format

您对这篇实验方法有问题吗？

在此处发布您的问题，我们将邀请本文作者来回答。同时，我们会将您的问题发布到Bio-protocol Exchange，以便寻求社区成员的帮助。

post 发布问题
0 Q&A