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HeLa细胞的核质分离及细胞核与细胞质中RNA抽提

Nuclear and cytoplasmic isolation and RNA extraction in HeLa cell

王 王怡旻*
范 范静*
程 程红

*Contributed equally to this work 发表时间: 2022年09月15日 DOI: 10.21769/BioProtoc.1010804 浏览次数: 3253

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摘要：细胞核质分离后抽提RNA能够高效、特异地得到细胞核和细胞质中的RNA，是研究RNA出核及降解相关问题时常用的实验方法。由于细胞质膜和核膜中胆固醇含量的不同，核膜比质膜更致密，所以针对两层膜设计能破坏质膜但不破坏核膜的裂解液，就可以实现细胞核质分离。TRIzol中含有苯酚、异硫氰酸胍等物质，能从细胞组织中抽提RNA的同时保持RNA的完整性。此方法相较于其他核质分离方法具有用时少、操作简便、对样品需求量较少等优势。通过此方法获得的RNA可用于RT-PCR、RNA测序等实验，研究在不同实验条件下RNA在细胞核和胞质中的定位以及丰度变化。

Keywords: 细胞核 search 细胞质 search RNA search 抽提 search

材料与试剂

  1. 1.5 ml RNase-free 离心管 (Biosharp)
  2. Tirs-base (Sigma, catalog number: T1503-1KG)
  3. NaCl (Sigma, catalog number: S3014-1KG)
  4. MgCl2 (Sigma, catalog number: 63068-250G)
  5. Igepal CA-630 (Sigma, catalog number: 18896-50ML)
  6. Sodium deoxycholate (Sigma, catalog number: D6750-25G)
  7. Ribonucleoside Vanadyl Complex, RVC (New England BioLabs, catalog number: S1402S)
  8. NaCl (Sigma, catalog number: S3014-1KG)
  9. Na2HPO4 (Sigma, catalog number: S3264-500G)
  10. KCl (Sigma, catalog number: P9541-1KG)
  11. KH2PO4 (Fluka, catalog number: 60218)
  12. 胰酶 (GibcoTM, catalog number: 25200072)
  13. TRIzol (Sigma, catalog number: T9424-100ML)
  14. 氯仿 (国药试剂)
  15. 20mg/ml 糖原 (Sigma, catalog number: G8751-5G)
  16. 异丙醇 (Sigma, catalog number: I9030-500ML)
  17. 乙醇 (泰坦科技，catalog number: G73537B)
  18. Lysis buffer (见溶液配方)
  19. Lysis buffer + Sodium deoxycholate (见溶液配方)
  20. 1x PBS (见溶液配方)

仪器设备

  1. 移液器 (Gilson)
  2. 载玻片 (世泰，catalog number: 188105W)
  3. 冷冻离心机 (Eppendorf, model: Centrifuge 5424 R)
  4. 显微镜 (Olympus, model: IX71)
  5. -80 °C超低温冰箱 (Thermo Fisher Scientific, model: Heto Ultra Freeze)
  6. pH计 (Mettler Toledo, SevenEasy 8603)
  7. CO2培养箱 (Thermo Fisher Scientific, model: Forma Water Jacketed CO2 Incubator 3111)
  8. 紫外分光光度计 (Thermo Fisher Scientific, model: NanoDrop 2000)

实验步骤

Copyright: © 2022 The Authors; exclusive licensee Bio-protocol LLC.
引用格式：王怡旻, 范静, 程红. (2022). HeLa细胞的核质分离及细胞核与细胞质中RNA抽提. Bio-101: e1010804. DOI: 10.21769/BioProtoc.1010804.
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How to cite: Wang, Y. M., Fan, J. and Cheng, H. (2022). Nuclear and cytoplasmic isolation and RNA extraction in HeLa cell. Bio-101: e1010804. DOI: 10.21769/BioProtoc.1010804.
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