实验步骤--蛋白质印迹第10步 "30V电压转膜,4°C 过夜" 其中 过夜是个什么概念,大概多少小时?实验步骤--蛋白质印迹第3步中...

Yuanqing Lin
Yuanqing Lin
Aug 31, 2011
protocol Protocol: Western Blot for Detecting Phosphorylated STAT3
实验步骤--蛋白质印迹第10步 "30V电压转膜,4°C 过夜" 其中 过夜是个什么概念,大概多少小时?
实验步骤--蛋白质印迹第3步中 “迅速将细胞刮下并转移到离心管中” ,将细胞刮下来是否会弄伤细胞?由于有好几个点,对时间间隔有无特殊要求?他现在是贴壁的细胞,采用胰酶将细胞转移下来是否也可以?
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bio-protocol Answered Aug 31, 2011

过夜我一般是从晚上6点到第二天早上8点,时间长一点也没关系。
蛋白质印迹第三步由于已经加了蛋白裂解液,细胞已经被裂解了。贴壁的细胞用胰酶消化后离心,再用裂解液重悬细胞沉淀也可以,大多数时候我就是这样做的。如果对时间点要求比较高的话,我一般是把所有的不同时间点的细胞沉淀先收集冻在-80度,然后一起裂解分离蛋白。
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