Caesarean Section in Mouse

材料与试剂

1. 医用湿巾 (含75%酒精)
2. 纸巾
3. 无菌垫
4. 适龄孕鼠
5. 代乳母鼠
   

仪器设备

1. 组织剪
2. 解剖剪
3. 解剖镊
4. 加热垫
   

实验步骤

1. 准备适龄孕鼠和代乳母鼠：小鼠剖腹产一般进行于胚胎期第19天，即查到阴栓后的第18天下午 (查到栓当天清晨计为0.5天)。代乳母鼠应已产仔不超过5天，以0-2天为最佳。
2. 准备好手术需要的所有器械和物品。所有器械使用前应高温消毒，或用75%酒精擦拭消毒。
3. 通过颈椎脱臼法快速处死孕鼠。不能使用药物过量麻醉法或窒息法处死，否则会影响仔鼠存活。
4. 腹部做切口取出子宫：用75%酒精消毒小鼠腹部，使用解剖剪沿中线快速剪开皮肤和肌肉。可观察到成串的胚胎位于腹腔两侧。用钝头的器械或用手指将子宫取出放置于无菌垫上。
5. 取出胚胎：小心地剪开子宫壁，暴露胎膜包裹下的胚胎。剥离卵黄囊和羊膜，剪断脐带。
6. 擦拭胚胎表面的羊水并刺激其呼吸：用指腹在干净的纸巾上轻柔滚动胚胎，以促进呼吸和清除胚胎表面和口鼻处的羊水和分泌物。
7. 将仔鼠转移至37 °C加热垫上装有潮湿的纸巾的容器中保持体温。能够正常自主呼吸的仔鼠由于血液含氧量的增加，将由暗红变成粉红，活动活跃，并在轻夹尾巴时发出叫声。
8. 将能够正常呼吸的胎鼠转移至代乳笼中：适当拿出代乳鼠的原生仔鼠，使代乳后的最终仔鼠数量与代乳鼠原本仔鼠的数量相近，并将仔鼠与代乳笼中的垫料和原生仔鼠混合以沾染代乳鼠气味。要注意尽量缩小剖腹产仔鼠与原生仔鼠的体温差异。注意观察代乳母鼠是否将剖腹产仔鼠和原生仔鼠叼回哺乳。若代乳母鼠对剖腹产仔鼠有攻击行为，需及时更换。
   

结果与分析

1. 小鼠剖腹产可以很大程度上提高难以顺产的仔鼠存活率，提高实验效率。
   
2. 小鼠剖腹产需要操作者尽快完成实验，否则仔鼠有窒息的危险，同时也要注意操作轻柔不要伤到仔鼠，因此应该尽量快速熟练完成实验，并确保较高的剖腹产成功率。
   

注意事项

1. 为了提高仔鼠的存活率，从取出仔鼠到开始正常肺呼吸的过程，不宜超过2分钟，剖腹产全过程不宜超过10分钟。
2. 问题解析
   
   

致谢

感谢何苗老师组提供实验室、实验器材与孕鼠及何苗老师和陈扬师姐演示实验。本文改编自匡宇等 (1996)，师长宏等 (2011)，隋世燕等 (2010)，Behringer等 (2013)，Murphy等 (1993) 和参考文献6。

伦理学声明

本演示实验对小鼠进行的所有研究行为均遵循和符合国家《实验动物管理条例》和有关动物保护与使用的法律和法规，并获得复旦大学实验动物中心动物伦理委员会批准。请善待实验动物。

参考文献

1. 匡宇，王荫槐，张纪叔. (1996). 实验鼠的剖腹产代乳净化. 实验动物科学与管理 1996(4): 18-20.
2. 师长宏，冯秀亮，张海. (2011). 小鼠剖腹产技术. 基础动物实验技术与方法 
3. 隋世燕，王林刚，赖仲辉，夏俊辉. (2010). 小鼠剖腹产净化方法研究. 大理学院学报 09(10): 46-49.
4. Behringer, R., Gertsenstein, M., Nagy, K. and Nagy, A. (2013). Manipulating the mouse embryo: a laboratory manual. 4th edition. Cold Spring Harbor Laboratory Press.
5. Murphy, D. and Carter, D. A. (1993). Caesarean section and fostering. In: Transgenesis Techniques. Humana Press, 18(2): 177-178.
6. Needham, J., Smith, A. and Prestrud, K. W. Caesarian rederivation in the mouse.