Extraction and UPLC-detection of Furan Coumarin Monomer from Citrus Juice Sacs

材料与试剂

1. 离心管 (50 ml、10 ml)
   
2. 一次性注射器
   
3. 0.22 μm微孔滤膜
   
4. 柑橘成熟果实
   
5. 液氮
   
6. 乙腈：色谱级 (Fisher Scientific, USA)
   
7. 香柠檬亭，佛手苷，6',7'-二羟基香柠檬亭标准品：色谱级 (Sigma-Aldrich, USA)
   
8. 环氧香柠檬亭标准品：色谱级 (Chromdex, USA)
   
9. 乙酸乙酯：分析纯 (国药集团化学试剂有限公司，北京)
   
10. 超纯水
    

仪器设备

1. 研钵
   
2. 天平
   
3. 洁盟JP-100S超声波萃取仪 (洁盟，中国)
   
4. Avanti J-20 XP型离心机 (Beckman Counter, USA)
   
5. 5301型旋转蒸发仪 (Eppendorf, German)
   
6. Waters PRO PLUS型超纯水制备仪 (Labconco, USA)
   
7. Waters 超高效液相色谱 (UPLC)：二极管阵列检测器 (Photodiode Array Detector, PDA)，C18色谱柱 (规格为2.1 x 50 mm，粒径1.7 μm) (WATERS, USA)

实验步骤

1. 分离取出柑橘成熟果实汁胞，用液氮在研钵中磨成粉状。
   
2. 准确称量5 g粉状物，加入到50 ml的离心管中，加入15 ml提取试剂乙酸乙酯。
   
3. 充分振荡5 min，将离心管置于超声波萃取仪中萃取30 min。
   
4. 将离心管置于离心机中，转速为3,913 x g，离心5 min，收集上层有机相于新的离心管中。
   
5. 向50 ml离心管的残留物再加入10 ml乙酸乙酯，重复步骤3-4一次。
   
6. 重复步骤5一次。
   
7. 将收集的有机相分装到10 ml离心管中，通过旋转蒸发仪在30 °C条件下蒸干浓缩，用乙腈定容至1 ml，用一次性注射器吸取上清经0.22 µm微孔滤膜过滤后进行UPLC检测。
   
8. UPLC检测色谱条件：流动相A相乙腈溶液，B相超纯水，梯度洗脱条件见表1；流速0.4 ml/min；检测波长310 nm；进样量2 µl；样品室温度20 °C；色谱柱温度30 °C。
   
   表1. 呋喃香豆素单体物质梯度洗脱方法
   
   

结果与分析

4种呋喃香豆素单体标准品和梦能早柚的UPLC色谱图见图1。


图1. 四种呋喃香豆素单体标准品 (A) 和梦能早柚 (B) 的UPLC色谱图. RT指保留时间；1为佛手苷；2为6',7'-二羟基香柠檬亭；3为环氧香柠檬亭；4为香柠檬亭。

致谢

该实验方案改编自先前发表的文章Xu et al. (2015).

参考文献

1. Xu, J., Ma, L., Jiang, D., Zhu, S., Yan, F., Xie, Y., Xie, Z., Guo, W. and Deng, X. (2015). Content evaluation of 4 furanocoumarin monomers in various citrus germplasms. Food Chem 187: 75-81.
   
2. Widmer, W. and Haun, C. (2010). Variation in furanocoumarin content and new furanocoumarin dimers in commercial grapefruit (Citrus paradisi Macf.) juices. Journal of Food Science 70(4): C307-C312.