Improve Research Reproducibility A Bio-protocol resource
- Home
- Protocols
-
Peer-reviewed
Medium Preparation for Citrus Tissue Culture
*Contributed equally to this work Published: Jul 10, 2018 DOI: 10.21769/BioProtoc.1010184 Views: 6980
Download PDF
Ask a question
How to
cite
Favorite
Cited by
材料与试剂
- 活性炭
- KNO3
- NH4NO3
- KH2PO4
- MgSO4·7H2O
- CaCl2·2H2O
- KI
- H3BO3
- ZnSO4·7H2O
- NaMoO4·2H2O
- CuSO4·5H2O
- CoCl2·H2O
- MnSO4·4H2O
- VB1 (盐酸硫氨素) (Genview, catalog number: HV365)
- VB6 (盐酸吡哆素) (Genview, catalog number: HV368)
- VB3 (烟酸) (Genview, catalog number: HV364)
- VB
- VC (北京鼎国昌盛生物技术有限公司)
- 肌醇 (北京鼎国昌盛生物技术有限公司)
- 微量
- 铁盐
- 甘氨酸 (国药集团有限公司，catalog number: 62011519)
- 大量元素
- 蔗糖
- 琼脂
- 麦芽提取物
- L-谷氨酰胺
- BA (Genview)
- KT
- NAA (Genview, catalog number: IN211)
- IAA
- GA3 (Genview, catalog number: AG140)
- IBA (Genview, catalog number: II172)
- 蛋白胨
- 酵母提取物
- 氯化钠
- 水解络蛋白
仪器设备
- 量筒
- 烧杯
- 玻璃棒
- 棕色细口瓶
- 5 L存储瓶
- 天平
- 4 °C冰箱
实验步骤
一、培养基母液的配制
- 大量元素 (10倍液)：称取下列药品分别溶解定容到1 L后，加到5 L存储瓶中。
注：KNO3 95 g NH4NO3 82.5 g KH2PO4 8.5 g MgSO4·7H2O 18.5 g CaCl2·2H2O 22.0 g 1)配置母液前要仔细清洗存储容器。2)应按照顺序分别彻底溶解后混合，每加完一种药品，摇动存储瓶使其混合均匀。3)溶解时最好加热，以便充分溶解，避免沉淀的产生。4)夏季要用新制的蒸馏水，并加热，这样可以避免因为水中带菌量过大而产生沉淀，同时可以减缓绿藻的生成。5)沉淀的产生一是由于溶解不充分就混合造成的 (浑浊型沉淀)，所以配置时一定不要急；二是由于长菌而产生絮状沉淀，所以要用新制的蒸馏水并加热。 - 微量元素母液的配制 (100倍)：取少量 (200-300 ml) 温水依次加入下列药品，每加一种药品后搅拌溶解，最后定容到1 L。
注：KI 0.083 g H3BO3 0.62 g ZnSO4·7H2O 0.86 g NaMoO4·2H2O 0.025 g CuSO4·5H2O 0.0025 g CoCl2·6H2O 0.0025 g MnSO4·4H2O 2.23 g (MnSO4·H2O 1.69 g) 1)配好后在室温下放置10 h以上再放入冰箱保存，即刻放入冰箱易产生结晶沉淀。2)配制过程中产生沉淀的原因有：前一个没彻底溶解就加入了后一个药品；蒸馏水pH值过高，可加几滴盐酸校正。 - 甘氨酸和肌醇的配制 (100倍)：甘氨酸0.2 g溶解定容到1 L，肌醇10 g溶解定容到1 L。
- 铁盐的配制 (100倍)：称取EDTA 3.73 g，FeSO4·7H2O 2.78 g，分别溶解后混合定容到1 L，放入棕色细口瓶中，室温放置10 h以上 (防止结晶沉淀)，然后放入4 °C冰箱。
- 维生素B的配制 (100倍)
分别按顺序称取溶解在温热的蒸馏水中，定容到1 L。MT： VB1 (盐酸硫氨素) 1 g MS： 10 mg VB6 (盐酸吡哆素) 1 g 50 mg VB3 (烟酸) 0.5 g 50 mg
注：需要溶解完一个再加另一个，VB3不易溶解，需要搅拌，必要时可以加热。 - VC的配制：称取VC 0.5 g 溶解在蒸馏水中，定容到1 L即可。
- 其他：BA，NAA，IBA，GA3等激素类试剂可先用少量1 M NaOH彻底溶解，再加水定容。配好后在室温放置一段时间，再放入4 ℃冰箱中冷藏保存。有些试剂在乙醇或盐酸中也可溶解，但比较而言，用碱溶解比较稳定，不易产生沉淀。
注：母液最好不要配制太多，如果配制的量较大，短时间内用不完，最好分装一部分到小的细口瓶中，在做培养基时使用。这样不容易产生沉淀。
二、各种培养基配方
- MT基本培养基 (1 L)
VB 10 ml VC 10 ml 肌醇 10 ml 微量 10 ml 铁盐 10 ml 甘氨酸 10 ml 大量元素 100 ml 蔗糖 40 g 琼脂 8 g - MT悬浮培养基 (1 L)
VB 10 ml VC 10 ml 肌醇 10 ml 微量 10 ml 铁盐 10 ml 甘氨酸 10 ml 大量元素 100 ml 蔗糖 40 g 麦芽提取物 0.5 g L-谷氨酰胺 1.5 g - MT播种培养基 (1 L)
VB 10 ml VC 10 ml 肌醇 10 ml 微量 10 ml 铁盐 10 ml 甘氨酸 10 ml 大量元素 100 ml 蔗糖 25 g 琼脂 8 g - 生芽培养基 (1 L)
VB 10 ml VC 10 ml 肌醇 10 ml 微量 10 ml 铁盐 10 ml 甘氨酸 10 ml 大量元素 100 ml 蔗糖 40 g BA 0.5 mg KT 0.5 mg NAA 0.1 mg 琼脂 8 g - 伸长培养基 (1 L)
VB 10 ml VC 10 ml 肌醇 10 ml 微量 10 ml 铁盐 10 ml 甘氨酸 10 ml 大量元素 100 ml 蔗糖 40 g BA 0.1 mg IAA 0.5 mg GA3 0.5 mg 琼脂 8 g - 生根培养基 (1 L)
注：以上培养基PH应调到5.8-6.0之间，配好分装灭菌后使用，各类激素可配成母液按照相对应的量吸取加入即可。VB 10 ml VC 10 ml 肌醇 10 ml 微量 10 ml 铁盐 10 ml 甘氨酸 10 ml 大量元素 50 ml 蔗糖 25 g IBA 0.1 mg NAA 0.5 mg 活性炭 0.5 g 琼脂 8 g - 液体LB培养基 (1 L)
蛋白胨 10 g 酵母提取物 5 g 氯化钠 10 g - 固体LB培养基 (1 L)
注：固体液体培养基均不需要调pH，配好分装灭菌后使用。蛋白胨 10 g 酵母提取物 5 g 氯化钠 10 g 琼脂 15 g - YEB培养基 (1 L)
注：YEB培养基pH为7.0，可不调pH。蛋白胨 1 g 酵母提取物 5 g 水解络蛋白 5 g 七水硫酸镁 0.493 g 琼脂 15-20 g
Copyright: © 2018 The Authors; exclusive licensee Bio-protocol LLC.
Category
Plant Science > Plant cell biology > Tissue analysis
Plant Science > Plant cell biology > Tissue isolation and culture
Cell Biology > Tissue analysis > Tissue culture
Do you have any questions about this protocol?
Post your question to gather feedback from the community. We will also invite the authors of this article to respond.
0/150
Tips for asking effective questions
+ Description
Write a detailed description. Include all information that will help others answer your question including experimental processes, conditions, and relevant images.
Post a Question0 Q&A
